镍致职业性接触性皮炎的机制初探

发布时间：2020-10-18 16:06

　　 研究目的由镍引起的职业性接触性皮炎(OCD)是一种常见的职业性皮肤病,也是我国职业卫生领域需要关注的问题。OCD的发生会给人们带来生活和工作上的不便。目前对该病的发病机制虽有研究但尚未明确,难以向患者提供有效的预防和治疗措施。本文试图通过对2种免疫相关细胞的共培养,探索镍致OCD过程中细胞间相互作用的可能机制。通过检测HaCaT细胞活率、THP-1细胞内ROS水平及其表面标志物CD54、CD86的表达情况,以及炎性因子IL-18、IL-1β和IL-8的分泌情况并进行分析,为2种镍化合物致OCD的机制做初步的探索。研究方法1.镍化合物对HaCaT细胞影响:配制不同浓度NiCl_2·6H_2O和NiSO_4·6H_2O溶液,使用MTT法分别检测2种化合物对体外培养HaCaT细胞的毒性作用。2.镍化合物对THP-1细胞的影响:配制不同浓度的NiCl_2·6H_2O和NiSO_4·6H_2O溶液,探讨THP-1在细胞活率大于50%时细胞内ROS水平和细胞表面标记物(CD54、CD86)变化。3.使用HaCaT细胞与THP-1细胞建立共培养体系,再暴露于不同浓度NiCl_2·6H_2O和NiSO_4·6H_2O溶液,检测THP-1细胞在受到镍刺激后表面标志物(CD54、CD86)的表达情况,同时对培养基中IL-18、IL-1β和IL-8浓度进行分析,比较2种细胞共培养与单细胞系统的各检测指标是否具有差异性,初步探索镍致OCD过程中2种细胞间相互作用的关系。研究结果1.在本实验条件下,2种镍化合物均能对HaCaT细胞产生毒性作用,其中NiCl_2·6H_2O的IC_(50)均值为273.44μg/mL,CV75为113.30μg/mL;NiSO_4·6H_2O的IC_(50)与CV75均值分别为392.71μg/mL与191.65μg/mL,其诱导OCD产生的机制可能与其对表皮细胞的损伤有关。2.由2种镍化合物对THP-1细胞影响的结果来看,在本实验设计浓度范围内,NiCl_2·6H_2O未能引起THP-1细胞内ROS水平和细胞表面标志物CD86、CD54的上升;NiSO_4·6H_2O也未能引起THP-1细胞内ROS水平改变,但可以使THP-1细胞表面标志物CD86、CD54上升,说明2种镍化合物致敏机制均不会引起THP-1细胞内ROS水平改变。NiCl_2·6H_2O引起致敏过程中不会直接作用于THP-1细胞,而NiSO_4·6H_2O可以直接激活THP-1细胞,引起细胞表面标志物上升,说明镍盐所结合酸根离子(Cl~—、SO_4~(2-))可能对其致敏机制存在一定影响。3.在本实验条件下,使用HaCaT细胞与THP-1细胞共培养方法的实验结果表明,在共培养系统下,仍未观察到NiCl_2·6H_2O对THP-1细胞表面标志物CD86、CD54表达的影响,而能增强NiSO_4·6H_2O对THP-1细胞表面标志物的影响。比较2种镍化合物对HaCaT细胞和THP-1细胞炎性因子分泌结果发现,2种镍化合物在各浓度下均未引起HaCaT细胞IL-8分泌增加,但能促进IL-1β分泌增加且有随浓度上升而增加趋势,在浓度为125μg/mL和250μg/mL时能促进IL-18分泌增加,而在31.25μg/mL和62.50μg/mL浓度下未观察影响;均未引起THP-1细胞分泌IL-18,能促进IL-8和IL-1β的分泌,但未见显著的剂量效应关系;使用共培养时,在浓度低于125μg/mL时,其对IL-18的影响并不明显,在250μg/mL能促进IL-18分泌增加,但显著低于HaCaT细胞组,对IL-8分泌相比THP-1细胞组间差异无统计学意义,而IL-1β分泌量显著高于两单细胞组浓度之和。说明,HaCaT细胞产生的IL-18可能与THP-1细胞表面受体结合,使培养基中IL-18浓度降低;2种细胞间的相互作用能够促进IL-1β的分泌;THP-1细胞分泌IL-8不受HaCaT细胞影响。研究结论本研究通过对HaCaT细胞与THP-1细胞的体外培养,对2种镍化合物的致敏机制进行了初步探讨。NiCl_2·6H_2O和NiSO_4·6H_2O致OCD的机制可能与其对HaCaT细胞损伤有关;与THP-1细胞内ROS水平无关;其中NiCl_2·6H_2O致OCD可能与THP-1细胞活化无关,NiSO_4·6H_2O可通过THP-1细胞活化引起OCD;在OCD发生过程中,HaCaT细胞产生的IL-18可能会作用于THP-1细胞,2种细胞在共同培养时能促进IL-1β分泌增加,THP-1细胞分泌IL-8可能不受HaCaT细胞调控。
【学位单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R135.7
【部分图文】：

实验流程图

图 2.1 受试物 96 孔板加样图1）细胞铺板：待 HaCaT 角质细胞长至培养瓶底 85%时，将细胞消化下来制成胞悬液，根据生长曲线结果确定铺板细胞密度，本实验设置细胞密度为 0.9×105/mL，取 100 μL 每孔细胞悬液接种于 96 孔板孵育 24 h 待暴露。

图 2.2 HaCaT 细胞（第 8 代，左图：40×；右图 100×）图 2.2 为 HaCaT 细胞正常生长状态。左图见细胞密度适中，大小均匀，过多细胞碎片和漂浮状态，紧密贴于瓶底，偶尔见细胞聚集，说明细胞处于期，生长活跃。右图可观察细胞形态，呈不规则形，界限清晰，连接紧密，
【参考文献】

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1 王琳;陈勇;;欧盟及我国职业性皮肤病防治现状及措施[J];新疆医学;2015年01期

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3 杜鹃;周文明;;金属与变应性接触性皮炎的研究进展[J];安徽医科大学学报;2013年10期

4 赵伟峰;陆东庆;彭晓;;镍接触性皮炎患者外周血CD4~+CD25~+ T细胞的检测及意义[J];重庆医学;2012年10期

5 孙应彪;陈建华;刘一亚;宋媛朝;朱玉真;;硫酸镍致大鼠睾丸细胞线粒体及微粒体损伤[J];中国公共卫生;2007年04期

6 皮嵩云;王艳;张玉莲;;低浓度镍对人体健康影响的探讨[J];实用预防医学;2006年04期

7 薛春霄,纪玉良,白永利,陈涛;职业性光毒性皮炎后色素沉着61例临床分析[J];临床皮肤科杂志;2004年03期

8 陈少杰,陈晓艺,陈永昆;某写字板主芯生产厂工人皮肤病调查报告[J];海峡预防医学杂志;2003年03期

9 顾祖球;邻苯二酸酐致职业性接触性皮炎19例临床及原因调查分析[J];苏州大学学报(医学版);2002年02期

10 皮肖冰,王晓霞,麦玉妹;镀镍物品所致接触性皮炎56例分析[J];岭南皮肤性病科杂志;2001年04期

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1 张利英;空气细颗粒物中Ni对血管内皮细胞作用的研究[D];兰州大学;2011年

本文编号：2846518