糖皮质激素的检测新方法研究

发布时间：2020-10-21 20:39

　　 糖皮质激素具有抗炎、抗过敏等药理作用,但过多摄入糖皮质激素就会引发肥胖,高血压,骨质疏松等疾病。人类常见的癌症、畸形、抗药性、青少年早熟、中老年心血管疾病等问题均与畜禽产品中的抗生素、激素等药物的残留有关。现在中国、日本和欧盟都对糖皮质激素规定了最大残留量,而且我国还将部分糖皮质激素规定为违禁药物。因此,建立一类灵敏、高效、可靠的糖皮质激素检测方法就显得尤为重要。本文研究了丙酸倍氯米松、丁酸氢化可的松、苯丙酸诺龙几种糖皮质激素的高效液相色谱检测法,主要研究内容如下： 浊点萃取(CPE)-高效液相色谱法检测糖皮质激素的研究 1、超声辅助浊点萃取(US-CPE)-HPLC检测牛奶中糖皮质激素的研究 建立超声辅助浊点萃取(US-CPE)-高效液相色谱法检测牛奶中的三种糖皮质激素(丙酸倍氯米松,丁酸氢化可的松,苯丙酸诺龙)。本研究探讨了TMN-6相变化分离过程,得到浊点萃取的最有条件为3%(v/v) TMN-6,3%(w/v) NaCl,在平衡温度35℃平衡40mmin,最终富集因子为10。三种糖皮质激素浓度在1-500ng mL-1范围内与色谱峰面积呈良好线性,检测限分别为：丙酸倍氯米松0.10ng mL-1,丁酸氢化可的松0.13ng mL-1,苯丙酸诺龙0.17ng mL-1。方法的平均回收率大于90%,相对标准偏差在0.5%-2.8%。 2、助乳化剂超声辅助浊点萃取(CUS-CPE)-HPLC检测尿液中糖皮质激素的研究 本研究讨论了四种浊点萃取体系(DC-193-壬酸,DC-193-硫酸钠,DC-193-月桂酸和经典的Triton X-100体系),表面活性剂DC-193本身浊点温度较高,用助乳化剂壬酸来降低浊点,大大降低了浊点温度,提高了回收率和富集倍数。优化后最优萃取条件为2.5%(v/v)DC-193,35kHz和65℃超声30min,1mL壬酸,4000rpm离心3mmin,富集倍数达35。1-350ng mL-1范围内,三种糖皮质激素线性良好,检测限为1.29-3.33ng mL-1,回收率高于85%,相对标准偏差为1.3-2.7%。 液相微萃取(LPME)-高效液相色谱法检测糖皮质激素的研究1、表面活性剂超声辅助分散液液微萃取(UA-DLLME)和衍生-高效液相色谱法检测尿液和血液中糖皮质激素的研究 以表面活性剂Triton X-100作为分散剂,四氯化碳作为萃取剂,水杨醛为衍生试剂连续进行萃取和衍生。对一些关键参数包括萃取剂和分散剂的性质和用量,衍生试剂量,萃取时间和温度的影响进行了研究。三种糖皮质激素浓度在1-300ng mL-1线性良好。所有校准曲线的相关系数均高于0.9993。回收率为80.36%-87.60%,富集系数为50, LOD为0.014-0.314ng mL-1,相对标准偏差为1.66%-2.72%。结果表明,该方法适用于人体尿液和血液样品中微量糖皮质激素的检测。2、离子液体涡旋辅助协同微萃取(ILSVA-SME)-高效液相色谱法检测环境水样中糖皮质激素的研究 本研究用1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([BMIM] PF6)作萃取剂,非离子型表面活性剂的Triton X-100(TX-100)作协同试剂,在常温下迅速完成萃取过程。与传统的液液萃取(LLE)和浊点萃取(CPE)相比,该方法在8mmin内完成,并且有较高的回收率(≥97.24%)。最后优化的结果：三种激素在0.6-300ng mL-1的范围内有良好的线性关系,相关系数为0.997,检测限为4.11-9.19ng mL-1,相对标准偏差(RSD)为1.57-1.81%,富集倍数为99.85。该方法大大提高了灵敏度,缩短了分析时间,并得到了较高的富集倍数,成功用于环境水样中糖皮质激素的检测。三、超分子涡旋混合微萃取(SS-BVMME)-高效液相色谱法检测环境水样中糖皮质激素的研究 该方法打破经典的超分子溶剂的组成,用离子液体1-丁基-3甲基咪唑四氟硼酸盐([BMIM]BF4)和正丁醇对糖皮质激素在氢键和范德华力等驱动力的作用下进行分子识别和组装,探讨了溶液中氢键形成的相关理论并论证,结果优化后有很合适的匹配性。该方法20mmin即完成检测,三种激素在0.5-100ng mL-1的范围内有良好的线性关系,相关系数均大于0.9971,检测限为0.09925-2.428ng mL-1,回收率为88-103%,相对标准偏差为0.6-4%。该方法成功应用于环境水样中糖皮质激素的检测。
【学位单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2013
【中图分类】：R155.5
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
插图和附表清单
第一章 绪论
    1.1 引言
    1.2 糖皮质激素的检测方法
        1.2.1 高效液相色谱法
        1.2.2 气相色谱法
        1.2.3 液质联用法
        1.2.4 气质联用法
        1.2.5 超临界流体色谱联用法
        1.2.6 免疫分析法
        1.2.7 毛细管电泳法
    1.3 糖皮质激素残留样品前处理技术
        1.3.1 液-液萃取
        1.3.2 固相萃取
        1.3.3 基质固相分散萃取技术
        1.3.4 超临界流体萃取技术
        1.3.5 免疫亲和色谱
        1.3.6 浊点萃取
        1.3.7 分散液液微萃取
        1.3.8 超分子萃取
    1.4 论文研究意义、内容和创新点
        1.4.1 研究意义
        1.4.2 研究内容
        1.4.3 创新点
第二章 浊点萃取（CPE）-高效液相色谱法检测糖皮质激素的研究
    第一节 超声辅助浊点萃取（US-CPE）-HPLC检测牛奶中糖皮质激素的研究
        2.1 主要试剂与仪器
        2.2 实验部分
        2.3 结果与讨论
        2.4 小结
    第二节 助乳化剂超声辅助浊点萃取（CUS-CPE）-HPLC检测尿液中糖皮质激素的研究
        2.1 主要试剂与仪器
        2.2 实验部分
        2.3 结果与讨论
        2.4 小结
第三章 液相微萃取（LPME）-高效液相色谱法检测糖皮质激素的研究
    第一节 表面活性剂超声辅助分散液液微萃取（UA-DLLME）和衍生-高效液相色谱法检测尿液和血液中糖皮质激素的研究
        3.1 主要试剂与仪器
        3.2 实验部分
        3.3 结果与讨论
        3.4 小结
    第二节 离子液体涡旋辅助协同微萃取（ILSVA-SME）-高效液相色谱法检测环境水样中糖皮质激素的研究
        3.1 主要试剂与仪器
        3.2 实验部分
        3.3 结果与讨论
        3.4 小结
第四章 超分子涡旋混合微萃取（SS-BVMME）-高效液相色谱法检测环境水样中糖皮质激素的研究
    4.1 主要试剂与仪器
        4.1.1 主要试剂
        4.1.2 主要仪器
    4.2 实验部分
        4.2.1 溶液的配制
        4.2.2 溶液的配制
        4.2.3 样品前处理
        4.2.4 实验方法
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 超分子溶剂的筛选
        4.3.2 超分子溶剂自组装驱动力的研究
        4.3.3 实验优化
        4.3.4 方法学考察
        4.3.5 小结
第五章 结论
致谢
参考文献
附录A 攻读硕士期间发表论文目录

【参考文献】

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本文编号：2850573