BMSCs移植调控HD中毒大鼠神经组织NGF表达的机制研究

发布时间：2020-10-28 06:59

　　 目的:调查骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植调控2,5-己二酮(HD)中毒大鼠神经组织NGF表达的分子机制。为阐明BMSCs移植对HD中毒大鼠神经组织损伤的修复机制提供依据。方法:选用无特定病原体(specified pathogen free,SPF)级别的100只4-6周雄性SD大鼠,随机分为:正常对照组(Control)、干细胞对照组(BMSCs)、染毒组(HD)、自身修复组(HD-NS)、干细胞修复组(HD-BMSCs),每组20只。以浓度为0.9%的无菌生理盐水将2,5-己二酮稀释,对大鼠进行腹腔注射染毒。染毒组的剂量为400 mg/kg,注射量为0.3 ml/100 g,对照组给予同等剂量的无菌生理盐水。每个工作日的特定时间染毒1次,染毒周期为5周。染毒模型成功后,干细胞修复组经鼠尾静脉注射BMSCs,自身修复组给予相同剂量无菌生理盐水。干细胞修复5周后,每组动物分别提取血清、坐骨、脊髓等组织并置于-80℃深冻冰箱中低温保存。运用ELISA方法测定各组大鼠血清、脊髓和坐骨中NGF浓度,q RT-PCR和Western Blotting方法测定各组脊髓、坐骨中NGF表达;mi RNA微阵列芯片发现mi RNA Let-7家族在各组变化明显,差异倍数显著,应用q RT-PCR在各组坐骨、脊髓及VSC 4.1细胞对其进行验证,并发现Let-7e-5p差异变化最为明显;利用阳离子脂质体Lipofectamine 2000将化学合成的Let-7e-5p mimic、Let-7e-5p inhibitor的阴性对照序列及NGF si RNA 2分别转染进VSC 4.1细胞中,应用q RT-PCR、Western Blotting方法检测VSC 4.1细胞经处理后NGF的表达水平。数据分析选用SPSS 13.0统计学软件,结果选用Graph Pad Prism 5作图软件。结果:1.ELISA方法测定各组血清中NGF浓度结果显示,Control组NGF浓度为263 ng/ml;HD中毒组NGF浓度为136 ng/ml,低于Control组(p0.05);BMSCs修复组NGF浓度为187 ng/ml,高于HD中毒组(p0.05)。2.ELISA方法测定各组脊髓神经组织NGF浓度结果显示,Control组NGF浓度为397 ng/ml;HD中毒组NGF浓度为176 ng/ml,低于Control组(p0.05);BMSCs修复组NGF浓度为368 ng/ml,高于HD中毒组(p0.05)。q RT-PCR、Western Blotting方法检测各组脊髓神经组织NGF基因、蛋白表达结果显示,HD中毒组NGF表达显著低于Control组(p0.05);BMSCs修复组NGF表达高于HD中毒组(p0.05)。3.ELISA方法测定各组坐骨神经组织NGF浓度结果显示,Control组NGF浓度为201 ng/ml;HD中毒组NGF浓度为134 ng/ml,低于Control组(p0.05);BMSCs修复组NGF浓度为163 ng/ml,高于HD中毒组(p0.05)。q RT-PCR、Western Blotting方法检测各组坐骨神经组织NGF基因、蛋白表达结果显示,HD中毒组NGF表达显著低于Control组(p0.05);BMSCs修复组NGF表达高于HD中毒组(p0.05)。4.q RT-PCR结果显示,Let-7e-5p在各组坐骨、脊髓及VSC 4.1细胞中表达水平明显高于其他mi RNA Let-7家族(p0.01)。5.将Let-7e-5p mimic、inhibitor转染进VSC 4.1细胞,q RT-PCR与Western Blotting结果发现,转染Let-7e-5p mimic组的VSC 4.1细胞中NGF含量降低;转染Let-7e-5p inhibitor组的VSC 4.1细胞中NGF含量升高(p0.05)。6.敲除NGF后,细胞中NGF含量有所降低。7.将Let-7e-5p mimic、inhibitor及NGF si RNA 2转染进VSC4.1细胞后,q RT-PCR与Western Blotting结果发现,Let-7e-5p mimic+NGF si RNA 2组的VSC4.1细胞中NGF含量降低;Let-7e-5p inhibitor+NGF si RNA 2组的VSC 4.1细胞中NGF含量升高。结论:BMSCs移植显著提高HD中毒大鼠血清NGF浓度。BMSCs移植上调HD中毒大鼠脊髓、坐骨神经组织NGF表达。BMSCs移植下调HD中毒大鼠脊髓、坐骨神经组织mi RNA Let-7家族部分亚型。BMSCs介导mi RNA Let-7家族部分亚型负调控HD中毒大鼠神经组织内源性NGF表达。
【学位单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R114
【部分图文】：

各组大鼠脊髓神经组织NGF浓度

各组大鼠脊髓神经组织NGF基因表达

24为了验证脊髓神经组织的基因表达，用 Western Blotting 检测 NGF 蛋白表达结果如图4所示，HD中毒组NGF表达显著低于Control组（p <0.05）；BMSCs修复组 NGF 表达高于 HD 中毒组（p <0.05）。图 4 各组大鼠脊髓神经组织 NGF 蛋白表达注：*为与 Control 组相比 p <0.05，#为与 HD 中毒组相比 p <0.05.3. BMSCs 移植对 HD 中毒大鼠坐骨神经组织 NGF 水平的影响坐骨神经组织 NGF 浓度如图 5 所示，Control 组 NGF 浓度为 201 ng/ml；HD 中毒组 NGF 浓度为 134 ng/ml，低于 Control 组（p <0.05）；BMSCs 修复组 NGF 浓度为 163 ng/ml，高于 HD 中毒组（p <0.05）。
【参考文献】

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本文编号：2859757