蛋清源小肽促皮肤细胞迁移作用研究

发布时间：2020-11-03 19:57

　　 鸡蛋蛋清是食源性多肽的优质蛋白质来源,目前已证实蛋清肽具有抗血栓、抗炎、抗氧化、抗病毒等多种生物学活性,但其在促细胞迁移和皮肤创面愈合方面的研究较少。本文以蛋清浓缩粉为原料,通过酶解、超滤、葡聚糖凝胶层析和LC-MS等技术,分离纯化得到一系列蛋清小肽,并通过细胞迁移评价技术和动物实验,系统研究这些蛋清源小肽的促皮肤细胞迁移和小鼠创面愈合活性。结论如下:我们采用Alcalase碱性蛋白酶和复合风味蛋白酶,通过分步酶解,获得蛋清蛋白粗酶解液。将粗酶解液通过超滤系统,经由四种不同分子量大小孔径的滤膜进行分离,保留分子量小于1 kDa的超滤液。利用人永生化角质形成细胞HaCaT为细胞模型,通过划痕愈伤实验证实该小分子量超滤液具有促进细胞迁移的能力。我们进一步通过葡聚糖凝胶层析柱分离超滤液,得到四个蛋清肽组分。将这些组分命名为S1、S2、S3、S4。通过transwell小室细胞迁移实验筛选出S2组分具有较好的促细胞迁移能力。我们利用LC-MS技术对S2组分中的多肽序列进行分析,确定了22条高丰度小分子肽序列。我们在这22条小分子肽中随机选取了6条,采用半合成法进行合成,并考察了这些小分子肽对HaCaT细胞迁移和增殖能力的影响。我们的实验结果表明两条六肽LAYEER和LRDILN对HaCaT细胞具有较好的促迁移活性,其中LRDILN活性更为显著。我们进一步通过小鼠皮肤创面愈合实验考察了LRDILN对小鼠创面愈合过程的影响。我们在小鼠的背部构建一个直径7 mm的圆形伤口模型,将LRDILN溶解于生理盐水对伤口部位滴加给药。给药十天后,实验结果显示给药组伤口愈合速度明显快于对照组。我们分别在第0,4,8,10天取伤口边缘组织进行HE染色,病理切片结果提示伤口愈合过程中LRDILN对伤口与正常组织交界部位细胞成分具有积极影响。本研究创新性地初步探明了蛋清源小肽LRDILN可促进HaCaT细胞迁移,加速小鼠皮肤创面愈合进程,为蛋清源小肽在促伤口愈合方面的应用提供了理论依据。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R151
【部分图文】：

小分子蛋清肽对HaCaT细胞迁移能力的影响（划痕愈伤实验）

小分子蛋清肽对HaCaT细胞迁移能力的影响（细胞小室迁移实验）

SephadexG-15分离层析组分对HaCaT细胞迁移能力的影响（细胞小室
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本文编号：2869032