携带miR-27a的外泌体介导的电离辐射旁效应对皮肤伤口愈合的影响及其机制的研究
发布时间：2020-12-03 07:00
目的:急性放射性皮肤损伤的症状包括红斑、脱发、干燥脱屑和色素沉着,皮肤损伤严重程度与辐射剂量、剂量率、皮肤厚度以及射线品质有关。换句话说,在同样的物理照射剂量下,不同射线品质的辐射对同一个体将造成不同程度的皮肤损伤。一般认为自然发生的α粒子由于穿透力弱不能穿透人的皮肤表皮层,只有当其照射剂量达几百格瑞才可使皮肤出现红斑等明显的损伤,但是目前鲜少有文献可以证明低剂量α粒子照射不会对皮肤造成任何损伤。正因为α粒子射程短,根据放射生物学传统的靶理论,低剂量外照射仅会伤及皮肤表面角质层,而不会影响对皮肤损伤修复具有重要作用的真皮层成纤维细胞。然而由于可能存在电离辐射旁效应,低剂量α粒子照射也有可能通过旁效应信号影响真皮层,从而对皮肤修复功能造成损伤。已有研究结果提示,电离辐射旁效应可能在辐射的健康危害和肿瘤放疗的效率及副作用中具有重要作用。因此明确电离辐射旁效应在皮肤伤口愈合过程中的作用及其发生机制对降低辐射对正常细胞组织的危害具有重要现实意义。方法:本研究第一部分采用直接照射法和共培养法处理BALB/c小鼠背部皮肤,通过肉眼和皮肤石蜡切片HE染色观察其表观形态、通过游标卡尺测量伤口大小反映其...
【文章来源】：苏州大学江苏省
【文章页数】：111 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
电离辐射旁效应大事记大量的研究提示[26,50,55]
图 1.1 活体共培养模型。、Western Blot 检测受照小鼠皮肤γH2AX表达水平射后 30 min 小鼠皮肤置于冻存管内液氮速冻；适量强效裂解液（RIPA 强效裂解液、1% PMSF），冰上超声至皮；00 g、4 ℃，离心 10 min，取上清，用 BCA 试剂盒测蛋白浓度，多（Synergy 2，美国 BIO-TEK 公司）测量吸收光，波长 562 nm；相应体积的 5×SDS-PAGE 上样缓冲液，混合均匀，95 ℃变性 5 m12% SDS-PAGE 80 V 恒压电泳分离蛋白，湿法稳流（200 mA）转膜60 min；TBST 清洗膜 4 次，每次 5 min，3% BSA 室温封闭 1 h；（anti-γH2AX）孵育膜 4 ℃过夜，TBST 清洗膜 4 次，每次 10 m（HRP-anti-rabbit，碧云天，中国）室温孵育膜 1 h，TBST 清洗膜
实验结果一、α粒子直接照射对小鼠皮肤伤口愈合的影响γH2AX 被广泛用作 DNA 损伤的生物标记物。如图 1.2 所示，小鼠皮肤在受到 0.56 Gy 的α粒子照射后 30 min，其γH2AX 表达水平与未照射组相比出现显著增加，证实照射是成功的。然而受照小鼠皮肤直到第十天也并未出现肉眼可见的改变；这与文献报道[1]的一致。那么这样的α粒子剂量是否对皮肤没有任何影响呢？本研究发现小鼠受照区域的伤口愈合速度相比对照组明显减慢，如图 1.3，伤口制造后第三天和第七天，照射组伤口面积显著大于未照射组；到了第十天，照射组伤口愈合减慢趋势依然存在，但无统计学差异。另外研究还发现，伤口制造后第十天，皮肤已基本愈合，但是照射组愈合皮肤表皮层明显比未照射组厚，这也是照射组皮肤愈合更差的一个佐证。也就是说，虽然照射后小鼠皮肤没有出现肉眼可见的损伤，但实际上其生物学功能已经发生了一定程度的改变。
【参考文献】：
期刊论文
[1]外泌体—电离辐射诱导旁效应的另一种机制[J]. 陈纤,蒋友芹,尹晓明,田文倩,王敬东,杨红英. 辐射研究与辐射工艺学报. 2014(03)
[2]Inhibitory Effects of miR-146b-5p on Cell Migration and Invasion of Pancreatic Cancer by Targeting MMP16[J]. 林凡,王欣,揭志刚,洪晓泉,李旭,王敏,俞亚红. Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences). 2011(04)
本文编号：2896166
【文章来源】：苏州大学江苏省
【文章页数】：111 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
电离辐射旁效应大事记大量的研究提示[26,50,55]
图 1.1 活体共培养模型。、Western Blot 检测受照小鼠皮肤γH2AX表达水平射后 30 min 小鼠皮肤置于冻存管内液氮速冻；适量强效裂解液（RIPA 强效裂解液、1% PMSF），冰上超声至皮；00 g、4 ℃，离心 10 min，取上清，用 BCA 试剂盒测蛋白浓度，多（Synergy 2，美国 BIO-TEK 公司）测量吸收光，波长 562 nm；相应体积的 5×SDS-PAGE 上样缓冲液，混合均匀，95 ℃变性 5 m12% SDS-PAGE 80 V 恒压电泳分离蛋白，湿法稳流（200 mA）转膜60 min；TBST 清洗膜 4 次，每次 5 min，3% BSA 室温封闭 1 h；（anti-γH2AX）孵育膜 4 ℃过夜，TBST 清洗膜 4 次，每次 10 m（HRP-anti-rabbit，碧云天，中国）室温孵育膜 1 h，TBST 清洗膜
实验结果一、α粒子直接照射对小鼠皮肤伤口愈合的影响γH2AX 被广泛用作 DNA 损伤的生物标记物。如图 1.2 所示，小鼠皮肤在受到 0.56 Gy 的α粒子照射后 30 min，其γH2AX 表达水平与未照射组相比出现显著增加，证实照射是成功的。然而受照小鼠皮肤直到第十天也并未出现肉眼可见的改变；这与文献报道[1]的一致。那么这样的α粒子剂量是否对皮肤没有任何影响呢？本研究发现小鼠受照区域的伤口愈合速度相比对照组明显减慢，如图 1.3，伤口制造后第三天和第七天，照射组伤口面积显著大于未照射组；到了第十天，照射组伤口愈合减慢趋势依然存在，但无统计学差异。另外研究还发现，伤口制造后第十天，皮肤已基本愈合，但是照射组愈合皮肤表皮层明显比未照射组厚，这也是照射组皮肤愈合更差的一个佐证。也就是说，虽然照射后小鼠皮肤没有出现肉眼可见的损伤，但实际上其生物学功能已经发生了一定程度的改变。
【参考文献】：
期刊论文
[1]外泌体—电离辐射诱导旁效应的另一种机制[J]. 陈纤,蒋友芹,尹晓明,田文倩,王敬东,杨红英. 辐射研究与辐射工艺学报. 2014(03)
[2]Inhibitory Effects of miR-146b-5p on Cell Migration and Invasion of Pancreatic Cancer by Targeting MMP16[J]. 林凡,王欣,揭志刚,洪晓泉,李旭,王敏,俞亚红. Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences). 2011(04)
本文编号：2896166
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