外泌体型miR-487a/miR-487b簇在AFB1诱导的BEAS-2B细胞恶性转化进程中的作用研究

发布时间：2020-12-05 17:53

　　目的:筛选与黄曲霉毒素B1（AFB1）诱导的稳定表达CYP2A13的BEAS-2B（B-2A13）细胞恶性转化相关的关键外泌体型miRNAs簇;探索外泌体型miR-487a/miR-487b簇在AFB1诱导的B-2A13细胞恶性转化进程中的作用及其机制。方法:1.利用Affymetrix miRNA芯片中检测的AFB1长期低剂量处理的恶性转化的P50 B-2A13细胞株和未发生恶性转化的P50 B-Vector细胞株的mi RNAs表达谱,筛选出两种细胞间差异表达的miRNAs。2.采用OmicsBean软件分析差异表达的miRNAs的靶基因所参与的基因通路,再利用miRbase数据库对筛选出的miRNA逐一进行检索,筛选出成簇的miRNAs。3.使用SBI试剂盒提取细胞上清中的外泌体,采用RT-qPCR对比分析P50 B-2A13和B-2A13细胞及外泌体中miRNAs的相对表达水平,筛选出在细胞和外泌体中表达同步的miR-487a/miR-487b簇作为关键的外泌体型miRNAs簇。4.采用瞬时转染miRNA inhibitor的方法在P50 B-2A13细胞中分别单独和联合抑制m... 

【文章来源】：南京医科大学江苏省

【文章页数】：98 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

差异表达的miRNAs（芯片分析）

南京医科大学硕异表达的 miRNAs 调控的基因通路分析上调的 miRNAs 所调控靶基因的功能分析 1-2 所示，Biological Process，Cell Component，Molecular Fathway 是功能分析的 4 大类，分别代表生物过程、细胞组分GG 通路。以 p＜0.05 为标准，在上调 miRNAs 所调控的靶 个基因参与了生物过程，473 个基因参与细胞组分，513 个关，另外有 87 个基因参与 KEGG 通路。上调 miRNAs 的析中每个类别的计数如上图所示。

图 1-3 对上调 miRNA 的靶基因功能注释分析（GO 分析）如图 1-4 所示，对上调 miRNAs 的靶基因进行 Pathway 分析。Pathway 是指代谢通路，对差异 miRNAs 调控的基因进行 pathway 分析，可以了解实验条件下显著改变的代谢通路。上调的 miRNAs 所调控的靶基因参与多条通路，主要包括以下几方面的分子间相互作用和反应网络：代谢、遗传信息加工、环境信息加工、细胞转化、器官系统、人类疾病和其他。在环境信息加工中，上调miRNAs 所调控的靶基因主要参与 PI3K-Akt 信号通路、MAPK 信号通路、Rap1 信号通路、AMPK 信号通路、Hippo 信号通路等；在细胞转化中，落在内吞作用、激动蛋白细胞骨架调节、细胞粘附连接等通路的基因较多，说明细胞恶性转化的生物过程可能是受上调的 miRNAs 所调控的这些信号通路来完成的；对疾病富集结果显示，这些靶基因参与多种疾病进程，其中以肿瘤相关疾病为主，包括前列腺癌、结直肠癌、白血病、黑色素瘤、非小细胞肺癌等。这些上调的 miRNA 的靶基因在多种肿瘤中均有富集，说明这些 miRNAs 可能通

【参考文献】：
期刊论文
[1]Contamination of Aflatoxins in Different Kinds of Foods in China[J]. JUN WANG AND XIU-MEI LIU Institute of Nutrition and Food Safety, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 100050, China.  Biomedical and Environmental Sciences. 2007(06)



本文编号：2899849