神经营养因子NT3及其受体TrkC在锰致神经毒性中的作用及其机制

发布时间：2020-12-05 22:51

　　目的通过体外培养的小鼠原代神经元及体内小鼠短期、慢性染锰实验,测定不同浓度锰处理组神经营养因子NT3与其受体TrkC及其激活的下游信号转导通路相关蛋白和凋亡蛋白的表达情况,探讨NT3及其受体TrkC在锰致神经毒性的潜在作用机制。方法将体外培养的小鼠神经元经不同浓度的MnCl₂·4H₂O溶液处理24小时后,在倒置相差显微镜下观察染锰后细胞形态改变,经MTT法测定其存活率,确定小鼠神经元实验各处理组的染锰浓度。小鼠神经元按不同浓度染锰24小时后,经荧光定量PCR分析TrkC及NT3的mRNA表达水平;经Western Blot测定不同染锰剂量及不同染锰时间的细胞中NT3与TrkC及其下游信号转导通路相关蛋白（p-Akt、Akt,p-Erk,Erk,P-CREB,CREB）表达水平和其下游凋亡相关蛋白（Caspase3、Bax和Bcl2）的含量变化;经免疫荧光观察小鼠神经元内NT3及TrkC定位及变化情况;经TMRM染料染色后,分别经荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞的线粒体膜电位的变化情况;采用Annexin V-FITC细胞凋亡试剂盒、Tunel凋... 

【文章来源】：广西医科大学广西壮族自治区

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

小鼠原代培养神经元免疫荧光鉴定

图 1-3：各染锰组小鼠神经元存活率。*与 0 μM 组相比，p<0.05。不同锰处理组小鼠神经元镜下形态学观察小鼠神经元经不同剂量染锰后经倒置显微镜观察可见，胞体饱满透亮，细胞之间突起形成密集的网络；100μM稍有减少，折光性未见改变，突触网络仍清晰可见，200μM 剂量组的细胞密度降低，折光度下降，突起回缩以胞核为中心发生皱缩、变圆，可见有大量透亮的细胞组细胞密度明显降低，细胞的折光度明显下降，胞体及程度均较 200μM 剂量组严重，细胞聚集成团，见有密图 1-4。B

图 1-3：各染锰组小鼠神经元存活率。*与 0 μM 组相比，p<0.05。2.4 不同锰处理组小鼠神经元镜下形态学观察小鼠神经元经不同剂量染锰后经倒置显微镜观察可见， 0μM 剂量组的细胞胞体饱满透亮，细胞之间突起形成密集的网络；100μM 剂量组的细胞密度稍有减少，折光性未见改变，突触网络仍清晰可见，少数细胞胞体变圆；200μM 剂量组的细胞密度降低，折光度下降，突起回缩细胞聚集成团，胞质以胞核为中心发生皱缩、变圆，可见有大量透亮的细胞碎片；而 400μM剂量组细胞密度明显降低，细胞的折光度明显下降，胞体皱缩和突起回缩数量及程度均较 200μM 剂量组严重，细胞聚集成团，见有密集的细胞碎片。详见图 1-4。A B

【参考文献】：
期刊论文
[1]线粒体凋亡通路的研究进展[J]. 郑天胜,李翔.  医学综述. 2013(18)
[2]神经细胞凋亡在脑发育和神经退行性疾病中的作用[J]. 邓锦波,牛艳丽,皇甫超申.  医学研究杂志. 2010(08)



本文编号：2900229