硫酸软骨素的制备及其降血脂作用的研究

发布时间：2017-04-07 22:08

  本文关键词：硫酸软骨素的制备及其降血脂作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：以鸡软骨为原料,优化软骨中硫酸软骨素的提取、纯化等工艺流程,并研究硫酸软骨素的抗氧化效果和降血脂的功能。 以硫酸软骨素得率为考察指标,对稀碱-浓盐法、超声波辅助碱-酶法、超声波辅助碱-双酶法三种提取方法进行筛选,最终确定超声波辅助碱-双酶法为鸡软骨中硫酸软骨素的最佳提取方法。再应用Box-Behnken中心组合实验设计建立二次多项数学模型,进行响应曲面分析,对胃蛋白酶添加量、酶解温度和酶解时间三个因素进行优化组合,确定超声波辅助碱-双酶法提取硫酸软骨素的最佳工艺条件为：碱液浓度4%,料液比1：6g/mL,Na+浓度2.5mol/L,提取温度35℃,木瓜蛋白酶添加量为1.3：1000g/mL,胃蛋白酶添加量1.39：1000g/mL,酶解温度47.5℃,酶解时间102.5min,硫酸软骨素得率为28.67%,纯度为23.6%。 采用阴离子交换树脂法对提取的硫酸软骨素粗品进行第一次纯化,然后继续采用凝胶层析法对硫酸软骨素进行第二次纯化。首先通过静态吸附及解吸实验对离子交换树脂进行筛选,最终确定选用D218型阴离子交换树脂纯化硫酸软骨素。再通过动态吸附及解吸的单因素实验,优化阴离子交换树脂法纯化硫酸软骨素的工艺流程,其最佳工艺条件为：吸附液用量与树脂体积比为1：1；吸附流速为1.0mL/min;吸附时间为60min洗脱剂NaCl溶液的浓度为3.0mol/L；洗脱剂用量与树脂体积比为5：1,最佳解吸时间为75min,硫酸软骨素纯度为72.03%。然后选择葡聚糖凝胶G75进行再次纯化,通过单因素实验确定最佳工艺条件为：洗脱液乙酸-乙酸钠溶液的pH值为4.8,洗脱流速为0.7mL/min,在此工艺条件下得到的硫酸软骨素的纯度为99.30%,较第一次纯化提高了27.27%。 采用硫酸-咔唑法对鸡软骨中的提取物进行显色反应,对凝胶层析法纯化后得到的物质分别采用紫外光谱法、高效液相色谱法以及红外光谱法对其进行检测分析,证明从鸡软骨中提取的物质为硫酸软骨素。 对鸡软骨中提取的硫酸软骨素进行抗氧化活性研究,结果表明：硫酸软骨素对五种自由基都表现出较好的抑制效果。CS的总抗氧化能力以及对羟基自由基、超氧阴离子自由基和脂质体过氧化体系的抑制率最大可达到30.56U/mL、97.74%、80.69%、48.05%；对烷基自由基最大抑制率为78.57%。 对鸡软骨中提取的硫酸软骨素进行降血脂功能的研究,结果表明：对高血脂症小鼠进行灌胃硫酸软骨素后,可降低小鼠血液中的总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白指标,同时升高高密度脂蛋白指标,并且随着硫酸软骨素添加量的增加,作用效果有增强的趋势。
【关键词】：鸡软骨 硫酸软骨素 提取 纯化 抗氧化 降血脂
【学位授予单位】：哈尔滨商业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：TS251.94;R151
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-11
• 1 绪论11-21
• 1.1 概述11
• 1.2 硫酸软骨素概况11-16
• 1.2.1 硫酸软骨素概念11
• 1.2.2 硫酸软骨素的结构、分类及分布11-12
• 1.2.3 硫酸软骨素的理化性质12-13
• 1.2.4 硫酸软骨素的生理功能13-15
• 1.2.5 硫酸软骨素的应用15-16
• 1.3 国内外在该方向的研究发展及分析16-20
• 1.3.1 硫酸软骨素的提取方法16-18
• 1.3.2 硫酸软骨素的分离纯化18-20
• 1.4 课题研究的目的和意义20
• 1.5 课题来源20
• 1.6 本课题研究的主要内容20-21
• 2 响应曲面法优化鸡软骨中硫酸软骨素的提取工艺21-35
• 2.1 引言21
• 2.2 实验部分21-22
• 2.2.1 实验仪器21
• 2.2.2 实验材料21-22
• 2.3 实验方法22-25
• 2.3.1 硫酸软骨素含量的测定22-23
• 2.3.2 硫酸软骨素提取方法的选择23
• 2.3.3 硫酸软骨素提取工艺的单因素实验23-25
• 2.3.4 响应曲面法优化硫酸软骨素的提取工艺条件25
• 2.4 实验结果与分析25-34
• 2.4.1 硫酸软骨素含量测定结果与分析25-26
• 2.4.2 硫酸软骨素提取方法筛选的结果与分析26-27
• 2.4.3 硫酸软骨素提取工艺单因素实验的结果与分析27-30
• 2.4.4 响应曲面法优化硫酸软骨素提取工艺条件实验的结果与分析30-34
• 2.4.5 验证试验结果分析34
• 2.5 本章小结34-35
• 3 硫酸软骨素分离纯化工艺的研究35-53
• 3.1 引言35
• 3.2 实验仪器与材料35-36
• 3.2.1 实验仪器35
• 3.2.2 实验材料35-36
• 3.3 实验方法36-40
• 3.3.1 离子交换树脂法纯化硫酸软骨素工艺条件的选择36-39
• 3.3.2 凝胶层析法纯化硫酸软骨素工艺条件的选择39-40
• 3.3.3 硫酸软骨素定性分析实验40
• 3.4 实验结果与分析40-51
• 3.4.1 离子交换树脂法纯化硫酸软骨素的实验结果与分析40-44
• 3.4.2 凝胶层析法纯化硫酸软骨素结果与分析44-49
• 3.4.3 硫酸软骨素定性分析实验结果与分析49-51
• 3.5 本章小结51-53
• 4 硫酸软骨素抗氧化效果评价53-60
• 4.1 引言53
• 4.2 实验仪器与材料53-54
• 4.2.1 实验仪器53
• 4.2.2 实验材料53-54
• 4.3 实验方法54-57
• 4.3.1 总抗氧化能力的测定54
• 4.3.2 抑制羟自由基能力的测定54-55
• 4.3.3 超氧阴离子自由基抑制能力的测定55
• 4.3.4 抑制烷自由基能力的测定55-56
• 4.3.5 抗脂质体过氧化能力的测定56-57
• 4.4 实验结果与分析57-59
• 4.4.1 测定总抗氧化能力的结果与分析57
• 4.4.2 抑制羟自由基能力的测定的结果与分析57-58
• 4.4.3 抑制超氧阴离子自由基能力的测定的结果与分析58
• 4.4.4 抑制烷自由基能力测定的结果与分析58-59
• 4.4.5 抗脂质体过氧化能力测定的结果与分析59
• 4.5 本章小结59-60
• 5 硫酸软骨素降血脂作用的研究60-68
• 5.1 引言60
• 5.2 实验仪器与材料60-61
• 5.2.1 实验仪器60
• 5.2.2 实验材料60-61
• 5.3 实验方法61-63
• 5.3.1 硫酸软骨素降血脂作用的研究61-62
• 5.3.2 硫酸软骨素外实验对脂肪酶活性抑制作用的研究62-63
• 5.3.3 数据处理与统计分析63
• 5.4 实验结果与分析63-66
• 5.4.1 硫酸软骨素降血脂作用的结果与分析63-65
• 5.4.2 硫酸软骨素体外实验对胰脂肪酶活性抑制作用影响的研究65-66
• 5.5 本章小结66-68
• 结论68-69
• 参考文献69-72
• 附录72-73
• 攻读学位期间发表的学术论文73-74
• 致谢74

【参考文献】

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本文编号：291417