Calpain在TOCP抑制SK-N-SH细胞自噬中的作用及机制研究

发布时间：2020-12-16 13:18

　　目的:本项目分别使用不同的钙离子通道抑制剂工具药和构建CAPNS1基因敲除SK-N-SH细胞模型(CAPNS1^-/-)来研究calpain在三邻甲苯基磷酸酯（Tri-ortho-cresyl phosphate,TOCP）引起SK-N-SH细胞自噬紊乱中的调节作用及机制。方法:1.利用CRISPR/Cas9技术构建CAPNS1基因敲除SK-N-SH细胞系(CAPNS1^-/-)。2.MTT法检测TOCP（0、0.25、0.5、0.75、1 mmol/L）对野生型SK-N-SH细胞(CAPNS1^+/+)和突变型SK-N-SH细胞(CAPNS1^-/-)增殖的影响,确定TOCP使用浓度。3.SK-N-SH细胞经Verapamil、2-APB、CsA预处理后,0.75mmol/L TOCP染毒,使用荧光分光光度计检测细胞内钙离子浓度变化和calpain活性变化,并用Western-blotting检测细胞中calpain和自噬相关蛋白水平。4.野生型SK-N-SH细胞(CAPNS1^+/+... 

【文章来源】：南华大学湖南省

【文章页数】：84 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

TOCP对SK-N-SH细胞增殖影响

TOCP对细胞内Ca2+浓度影响

活性为 142.79%（以对照组为 100%），与对照组相比，活性增加；同时 Western-blot检测 calpain1 和 calpain2 蛋白水平，两种蛋白水平上升，差异具有统计学意义（P<0.05）。而分别使用钙离子通道抑制剂 2-APB、Verapamil 和 CsA 预处理再经TOCP 染毒后，细胞内 calpain 活性分别为 126.15%、132.74%、125.80%，与 TOCP处理组相比，calpain 活性下降且 calpain1 及 calpain2 蛋白水平也有所下降（P<0.05），与钙离子浓度变化趋势一致。这些结果表明 TOCP 能够使细胞内钙离子浓度增加，从而激活 SK-N-SH 细胞内 calpain 活性，使 SK-N-SH 细胞内calpain1 和 calpain2 蛋白表达水平增加。

【参考文献】：
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本文编号：2920226