辐射敏感基因和血清SERS光谱作为潜在生物剂量计的实验研究

发布时间：2020-12-18 03:14

　　电离辐射能够导致细胞DNA断裂,引起基因表达发生变化,同时还能引起全身性的生理生化指标的变化。辐射后机体和分子的变化可用于估算生物受照剂量进而发展成生物剂量计。现有生物剂量计不能满足高通量快速检测的要求,本文以小鼠外周血和小鼠血清为样本分别利用RT-PCR技术和非标记表面增强拉曼光谱（SERS）检测技术,分别从辐射敏感基因和血清拉曼光谱角度探索新型生物剂量计。目的:（1）探索不同剂量照射后小鼠TRIAP1和AEN基因表达的时间与及剂量效应,研究其作为生物剂量计的潜能。（2）探索表面增强拉曼技术对不同剂量照射小鼠血清的识别能力,研究其作为辐射生物剂量计的可行性。材料和方法:（1）（a）对BAL B/C雄性小鼠进行1、2、4、8和12Gy的γ射线照射,再对新的一组小鼠注射LPS,获取小鼠外周血。（b）提取外周血总RNA,反转录、RT-PCR检测TRIAP1和AEN基因的表达。（c）对两基因进行相对表达分析和剂量效应曲线拟合。（2）（a）对C57BL/6J雄性小鼠进行2、5.5、7和8Gy（或者9Gy）的γ射线照射,获取小鼠血清。（b）将血清与银溶胶混合孵育一定时间,用拉曼检测仪进行检测获得... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：80 页

【学位级别】：硕士

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中英文缩略词表
摘要
Abstract
引言
第一部分 实时荧光定量PCR检测辐射敏感基因剂量效应的研究
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 研究对象
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 主要器材
            1.1.4 主要仪器
            1.1.5 基因引物和探针
            1.1.6 数据处理软件
        1.2 方法
            1.2.1 试剂溶液的配置
            1.2.2 照射BALB/C小鼠分组表
            1.2.3 尾静脉血的采集
            1.2.4 小鼠全身外周血的采集
            1.2.5 血清和去血清血的获取
            1.2.6 LPS腹腔注射方法和用量
            1.2.7 小鼠外周血淋巴细胞的分离
            1.2.8 小鼠外周血全血RNA提取
            1.2.9 淋巴细胞RNA的提取
            1.2.10 血清RNA的提取
            1.2.11 去血清外周血RNA的提取
            1.2.12 反转录获得cDNA的体系和程序
            1.2.13 Real-TimePCR反应体系和程序
    2 结果
        2.1 实验样本的选择
            2.1.1 外周血、去血清血和淋巴细胞中TRIAP1和AEN基因表达比较
            2.1.2 外周血、去血清血和血清中TRIAP1和AEN基因表达比较
        2.2 cDNA稀释倍数的优化
        2.3 建立BALB/C小鼠电离辐射模型
        2.4 辐射后两基因表达的时间效应与剂量效应分析
            2.4.1 TRIAP1基因表达时间-效应和剂量-效应分析
            2.4.2 AEN基因表达时间效应和剂量-效应分析
        2.5 TRIAP1和AEN基因在小鼠注射LPS模拟炎症反应中的相对表达分析
    3 讨论
        3.1 实验样本的选择
        3.2 目的基因的选择
        3.3 TRIAP1和AEN基因表达的时间效应与剂量效应
        3.4 TRIAP1和AEN基因的辐射敏感特异性
        3.5 实时定量PCR方法检测TRIAP1和AEN基因作为生物剂量计的展望
    4 结论
第二部分 表面增强拉曼（SERS）检测辐射小鼠血清方法建立
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 研究对象
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 主要器材
            1.1.4 主要仪器
            1.1.5 数据处理软件
        1.2 方法
            1.2.1 照射C57BL/6J小鼠分组表
            1.2.2 小鼠模型组数据采集时间安排
            1.2.3 尾静脉血的采集
            1.2.4 小鼠全身外周血的采集
            1.2.5 血清的获取
            1.2.6 SERS检测操作的流程
            1.2.7 银溶胶的制备步骤
            1.2.8 银溶胶的浓缩方式
            1.2.9 血清与纳米银溶胶混合检测步骤
    2 结果
        2.1 建立C57BL/6J小鼠电离辐射模型
        2.2 银溶胶质量的检验
        2.3 检测条件的优化
            2.3.1 银溶胶浓缩倍数的优化
            2.3.2 血清与银溶胶孵育温度的优化
            2.3.3 血清与银溶胶混合比例的优化
            2.3.4 血清与银溶胶孵育时间的优化
        2.4 不同辐射剂量小鼠血清SERS检测光谱
        2.5 小鼠不同辐射剂量OPLS-DA分类结果
        2.6 0Gy、7Gy和9Gy剂量组小鼠模型和SERS血清检测光谱
        2.7 0Gy、7Gy和9Gy不同剂量组OPLS-DA分类结果
        2.8 SERS峰位拉曼位移对应所属的分属物
    3 讨论
        3.1 实验条件的优化
        3.2 小鼠辐射损伤模型
        3.3 SERS检测辐射小鼠血清光谱
        3.4 OPLS-DA统计分析
        3.5 非标记SERS检测辐射小鼠血清技术作为快速现场检测方法的展望
    4 结论
参考文献
附录
在读期间发表论文
致谢
综述 辐射生物剂量计技术的研究进展
    参考文献



本文编号：2923244