茶多酚对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护研究

发布时间：2017-04-08 20:15

  本文关键词：茶多酚对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：茶能清肝明目,对视觉康复有很好的疗效。随着人类社会的发展,眼睛所受的光、辐射污染、年龄增长等一系列问题愈发严重,导致处于视网膜最外面一层的人视网膜色素上皮(HRPE)细胞慢性氧化损伤,而RPE细胞是治疗视网膜病变的关键。茶多酚(Tea polyphenols, TP)作为国际公认地强抗氧化剂,易于获取且人体易吸收。本文选取茶多酚粉末,研究其对过氧化氢(Hydrogen peroxide,H202)诱导的人视网膜色素上皮(HRPE-19)细胞抗氧化损伤的保护作用,为日后临床上利用茶多酚治疗年龄相关性黄斑病变等视网膜疾病和实现茶叶资源与眼科保健的跨界利用提供科学实验依据。实验采用500μmol·L-1的过氧化氢(H2O2)诱导体外培养ARPE-19细胞24h建立H2O2氧化损伤模型。确保茶多酚对ARPE-19细胞无增值和毒理作用后,设计5组进行对照实验：正常对照组,过氧化氢模型组,过氧化氢+4mg/mlTP组,过氧化氢+8mg/mlTP组,过氧化氢+16mg/mlTP组。MTT法检测ARPE-19细胞细胞活性,并应用紫外分光光度计法测定ARPE-19细胞细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量,最后利用Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞法测定细胞凋亡率。结果显示0-16mg/ml浓度的TP对ARPE-19细胞没有表现出明显的毒性作用和增殖作用：研究表明建立ARPE-19细胞氧化损伤模型最适宜的条件是用500 μmol/LH202浓度作用ARPE-19细胞24h,在此条件下,H202会造成ARPE-19细胞SOD活力降低,MDA含量增加,氧化程度加深,细胞凋亡增加。研究表明8mg/ml茶多酚就能通过发挥其超强的抗氧化能力来降低氧化应激指标,从而达到保护ARPE-19细胞的目的,进而延缓年龄相关性黄斑病变(AMD)等视网膜疾病的恶化。
【关键词】：茶多酚 人视网膜色素上皮细胞 氧化损伤 抗氧化
【学位授予单位】：福建农林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R151
【目录】：

• 摘要8-9
• Abstract9-11
• 第一章 绪论11-19
• 1.1 引言11
• 1.2 茶与视觉康复的相关性研究进展11-16
• 1.2.1 茶中的维生素与视觉康复11-12
• 1.2.2 茶中的脂肪酸与眼健康研究12-13
• 1.2.3 茶叶中的生物碱与眼保健的祖国医学观13-14
• 1.2.4 茶多酚对视网膜疾病的视觉康复14-16
• 1.3 研究的主要内容16-19
• 第二章 材料与方法19-31
• 2.1 实验材料19-23
• 2.1.1 实验细胞19
• 2.1.2 实验试剂19-20
• 2.1.3 实验仪器20
• 2.1.4 实验主要试剂及其配制方法20-23
• 2.1.4.1 PBS缓冲液20-21
• 2.1.4.2 RPMI-1640培养液21
• 2.1.4.3 胰蛋白酶21
• 2.1.4.4 冻存液21
• 2.1.4.5 茶多酚药液21-22
• 2.1.4.6 实验用H_2O_2溶液22-23
• 2.2 实验方法23-30
• 2.2.1 ARPE-19细胞培养的基本技术23-25
• 2.2.1.1 细胞房的无菌操作23
• 2.2.1.2 ARPE-19细胞的传代培养23-24
• 2.2.1.3 ARPE-19细胞的冻存和复苏24-25
• 2.2.1.4 ARPE-19细胞的计数与鉴定25
• 2.2.2 CCK-8法检测茶多酚对ARPE-19细胞的毒性作用25-26
• 2.2.3 MTT法检测茶多酚对ARPE-19细胞增殖影响26-27
• 2.2.4 过氧化氢诱导的ARPE-19氧化损伤模型的建立27-28
• 2.2.4.1 同一时间不同H_2O_2浓度下ARPE-19细胞活力变化27-28
• 2.2.4.2 同一H_2O_2浓度不同时间下ARPE-19细胞活力变化28
• 2.2.5 茶多酚对H_2_O2诱导的ARPE-19细胞氧化损伤的保护作用28-30
• 2.2.5.1 实验分组28
• 2.2.5.2 MTT检测ARPE-19细胞活力28-29
• 2.2.5.3 流式细胞Annexin V-FITC/PI荧光标记双染法检测hRPE细胞凋亡29
• 2.2.5.4 细胞氧化应激指标的测定29-30
• 2.3 统计学分析30-31
• 第三章 结果31-38
• 3.1 ARPE-19细胞的鉴定31
• 3.2 不同浓度茶多酚对ARPE-19细胞毒性的影响31-32
• 3.3 过氧化氢对ARPE-19细胞活力的影响研究32-34
• 3.3.1 不同H202浓度对ARPE-19细胞活力的影响32-33
• 3.3.2 H_2O_2不同作用时间对ARPE-19细胞活力的影响33-34
• 3.4 茶多酚对ARPE-19细胞增殖的影响34-35
• 3.5 茶多酚对H_2O_2氧化损伤ARPE-19细胞活性的影响35
• 3.6 Annexin V-FITC检测ARPE-19细胞凋亡35-37
• 3.7 茶多酚对H_2O_2氧化损伤ARPE-19细胞SOD活性、MDA含量的影响37-38
• 第四章 讨论38-42
• 4.1 过氧化氢诱导ARPE-19细胞氧化损伤模型的建立38-39
• 4.2 茶多酚对ARPE-19细胞增殖的影响39
• 4.3 茶多酚对H_2O_2诱导的ARPE-19细胞氧化应激损伤的保护39-42
• 第五章 结论与展望42-43
• 参考文献43-47
• 附录47-50
• 1. 中英文缩略词47
• 2. 硕士期间发表论文47-48
• 3. 本论文项目支撑48
• 4. 实验主要仪器和设备48-50
• 致谢50

【参考文献】

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  本文关键词：茶多酚对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的保护研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：293606