转人乳铁蛋白基因水稻及纯化蛋白的营养、食用安全及特殊功效评价与转GmDREB1/TaDREB4基因抗旱小麦营养学评价
发布时间：2020-12-29 20:08
目的评价转人乳铁蛋白基因水稻（genetically modified rice with human lactoferrin gene, hLF）的营养成分、铁的生物利用率及对大鼠缺铁性贫血的改善作用；观察重组人乳铁蛋白的（recombinant human lactoferrin gene, rhLF）致敏性和毒性,以评价从转hLF水稻提取纯化后的人乳铁蛋白的食用安全性；观察rhLF在体外的抑菌效果和在小鼠体内抑制沙门氏菌感染的效果,以评价rhLF的特殊功效；评价转GmDREB1/TaDREB4基因抗旱小麦的营养学价值。材料与方法1转人乳铁蛋白基因水稻的营养成分和特殊功效评价1.1营养成分分析和乳铁蛋白的检测采用国标方法测定转hLF水稻和亲本对照水稻的蛋白质、碳水化合物、脂肪、纤维素、维生素、矿物质和抗营养因子等成分；采用ELISA定量检测转基因水稻中乳铁蛋白的含量。1.2铁的生物利用率研究采用体外消化/Caco-2细胞模型测定转hLF水稻和对照亲本水稻中铁的吸收率。1.3改善大鼠缺铁性贫血的研究选取刚断乳雌性Wistar大鼠,体重45-55g。适应喂养7d后喂饲低铁饲料4周,造成...
【文章来源】：中国疾病预防控制中心北京市
【文章页数】：155 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
转HLF基因PCR鉴定结果
2结果2.1 rhLF的提取纯化、Westernb lot和分子量鉴定从转基因水稻中经硫酸铵分级沉淀、弱阳离子交换层析、分子蹄层析及膜包脱盐浓缩后，可获得较高纯度的rhLF (见图2-1 )。采用此种方法提取和纯化rhLF三次，采用Bradford法测定蛋白总量，用Bandscan5.0分析目的蛋白纯度，结果显示：纯度分别为88.0%,93%和90%,平均纯度约90%;蛋白冋收率分别是53.775，57.89%，55.01%,平均回收率约为55.55%。为进一步确定rhLF的表达，对纯化后的蛋白样品进行westerblot鉴定，加入焚光二抗经红外激光成像后，可看到明显的特异印迹条带（见图2-2)。根据条带位置显示，rhLF的分子量约为79 kDa。MALDI-TOF/TOF质谱仪分析的结果进一步显示，rhLF的精确分子量为78642.8，约为79 KDa (见图2-3)。
在所涉及的11个时间序列为5、10、15、20、30、45、60、卯和120mi然后各管中加入5 yL5X SDS-AGE蛋白上样缓冲液，并于100?加热5min，温冷却，5000r/rniti离心3min,取15tiL上样，将各时间点样品中的蛋白通SDS-AGE电泳检测。分离胶浓度为12%,考马斯亮兰染色，电泳结果由扫描记录，并进行分析。2结果2. 1 rhLF在模拟胃液中的稳定性大豆胰蛋白酶抑制剂和rhLF蛋白在模拟胃液中的稳定性分别见图2-162-17，SDS-PAGE凝胶电泳结果显示：大豆胰蛋白酶抑制剂在模拟胃液的Os，1530s, 60s，2m, 4m，8m, 15m, 30m 和 60 min 内均没有降解；rhLF 蛋白在 15s 有降解，但降解不完全，30s内则完全降解。
【参考文献】：
期刊论文
[1]重组人乳铁蛋白致敏性的初步研究[J]. 刘珊,陈惠芳,王小丹,冯晓莲,李晨汐,徐海滨. 中国食品卫生杂志. 2013(02)
[2]重组人乳铁蛋白对缺铁性贫血大鼠铁营养状况的改善作用[J]. 王小丹,刘珊,徐海滨,严卫星. 卫生研究. 2012(01)
[3]牛初乳中乳铁蛋白的分离纯化及其抗菌活性研究[J]. 邬向东,李平华,陈如圣,全炳昭,罗军荣. 江西畜牧兽医杂志. 2011(01)
[4]体外消化/Caco-2细胞模型评价面粉锌生物利用率[J]. 雷激,张明秋,张勇,黄承钰,白琳. 食品科学. 2011(01)
[5]重组猪乳铁蛋白N端的高效表达及抑菌活性检测[J]. 哈卓,赵丽丽,于晓旭,宗晓淋,毛雅元,张健,李一经,葛俊伟,乔薪瑗,唐丽杰. 生物工程学报. 2010(04)
[6]体外消化/Caco-2细胞模型评价铁生物强化玉米铁生物利用率[J]. 张明秋,王康宁,雷激,岳向峰,谢传晓,黄承钰. 营养学报. 2009(06)
[7]转基因小鼠乳汁中重组人乳铁蛋白的提取与抗菌活性分析[J]. 缪明星,袁玉国,安礼友,赵俊辉,柏亚军,郭磊,成勇. 农业生物技术学报. 2009(03)
[8]常乳中牛乳铁蛋白的纯化及抗菌活性研究[J]. 杨鹏华,倪凤娥. 安徽农业科学. 2009(16)
[9]体外消化/Caco-2细胞方法评价富铁小麦生物利用率[J]. 雷激,黄承钰,张勇,张明秋,白琳. 卫生研究. 2009(02)
[10]用体外消化/Caco-2细胞模型观察维生素C和柠檬酸对铁生物利用的影响[J]. 雷激,张明秋,黄承钰,白琳,何中虎. 南方医科大学学报. 2008(10)
博士论文
[1]转高赖氨酸基因、转人乳铁蛋白基因水稻的食用安全性评价与转豇豆胰蛋白酶抑制剂水稻的外源蛋白表达纯化[D]. 胡贻椿.中国疾病预防控制中心 2010
[2]基因工程技术提高稻米赖氨酸含量[D]. 刘巧泉.扬州大学 2002
硕士论文
[1]转人乳铁蛋白基因牛奶粉食用安全性评价[D]. 王洋.天津医科大学 2011
本文编号：2946233
【文章来源】：中国疾病预防控制中心北京市
【文章页数】：155 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
转HLF基因PCR鉴定结果
2结果2.1 rhLF的提取纯化、Westernb lot和分子量鉴定从转基因水稻中经硫酸铵分级沉淀、弱阳离子交换层析、分子蹄层析及膜包脱盐浓缩后，可获得较高纯度的rhLF (见图2-1 )。采用此种方法提取和纯化rhLF三次，采用Bradford法测定蛋白总量，用Bandscan5.0分析目的蛋白纯度，结果显示：纯度分别为88.0%,93%和90%,平均纯度约90%;蛋白冋收率分别是53.775，57.89%，55.01%,平均回收率约为55.55%。为进一步确定rhLF的表达，对纯化后的蛋白样品进行westerblot鉴定，加入焚光二抗经红外激光成像后，可看到明显的特异印迹条带（见图2-2)。根据条带位置显示，rhLF的分子量约为79 kDa。MALDI-TOF/TOF质谱仪分析的结果进一步显示，rhLF的精确分子量为78642.8，约为79 KDa (见图2-3)。
在所涉及的11个时间序列为5、10、15、20、30、45、60、卯和120mi然后各管中加入5 yL5X SDS-AGE蛋白上样缓冲液，并于100?加热5min，温冷却，5000r/rniti离心3min,取15tiL上样，将各时间点样品中的蛋白通SDS-AGE电泳检测。分离胶浓度为12%,考马斯亮兰染色，电泳结果由扫描记录，并进行分析。2结果2. 1 rhLF在模拟胃液中的稳定性大豆胰蛋白酶抑制剂和rhLF蛋白在模拟胃液中的稳定性分别见图2-162-17，SDS-PAGE凝胶电泳结果显示：大豆胰蛋白酶抑制剂在模拟胃液的Os，1530s, 60s，2m, 4m，8m, 15m, 30m 和 60 min 内均没有降解；rhLF 蛋白在 15s 有降解，但降解不完全，30s内则完全降解。
【参考文献】：
期刊论文
[1]重组人乳铁蛋白致敏性的初步研究[J]. 刘珊,陈惠芳,王小丹,冯晓莲,李晨汐,徐海滨. 中国食品卫生杂志. 2013(02)
[2]重组人乳铁蛋白对缺铁性贫血大鼠铁营养状况的改善作用[J]. 王小丹,刘珊,徐海滨,严卫星. 卫生研究. 2012(01)
[3]牛初乳中乳铁蛋白的分离纯化及其抗菌活性研究[J]. 邬向东,李平华,陈如圣,全炳昭,罗军荣. 江西畜牧兽医杂志. 2011(01)
[4]体外消化/Caco-2细胞模型评价面粉锌生物利用率[J]. 雷激,张明秋,张勇,黄承钰,白琳. 食品科学. 2011(01)
[5]重组猪乳铁蛋白N端的高效表达及抑菌活性检测[J]. 哈卓,赵丽丽,于晓旭,宗晓淋,毛雅元,张健,李一经,葛俊伟,乔薪瑗,唐丽杰. 生物工程学报. 2010(04)
[6]体外消化/Caco-2细胞模型评价铁生物强化玉米铁生物利用率[J]. 张明秋,王康宁,雷激,岳向峰,谢传晓,黄承钰. 营养学报. 2009(06)
[7]转基因小鼠乳汁中重组人乳铁蛋白的提取与抗菌活性分析[J]. 缪明星,袁玉国,安礼友,赵俊辉,柏亚军,郭磊,成勇. 农业生物技术学报. 2009(03)
[8]常乳中牛乳铁蛋白的纯化及抗菌活性研究[J]. 杨鹏华,倪凤娥. 安徽农业科学. 2009(16)
[9]体外消化/Caco-2细胞方法评价富铁小麦生物利用率[J]. 雷激,黄承钰,张勇,张明秋,白琳. 卫生研究. 2009(02)
[10]用体外消化/Caco-2细胞模型观察维生素C和柠檬酸对铁生物利用的影响[J]. 雷激,张明秋,黄承钰,白琳,何中虎. 南方医科大学学报. 2008(10)
博士论文
[1]转高赖氨酸基因、转人乳铁蛋白基因水稻的食用安全性评价与转豇豆胰蛋白酶抑制剂水稻的外源蛋白表达纯化[D]. 胡贻椿.中国疾病预防控制中心 2010
[2]基因工程技术提高稻米赖氨酸含量[D]. 刘巧泉.扬州大学 2002
硕士论文
[1]转人乳铁蛋白基因牛奶粉食用安全性评价[D]. 王洋.天津医科大学 2011
本文编号：2946233
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