mTOR信号通路在雷帕霉素调控锰诱导MN9D细胞凋亡中的作用研究

发布时间：2021-01-05 01:55

　　目的:以小鼠中脑多巴胺能神经元细胞（MN9D）为模型,探讨雷帕霉素在调控锰诱导MN9D细胞凋亡中的作用及可能机制,探讨mTOR信号通路在雷帕霉素调控锰诱导MN9D细胞凋亡中作用及其可能机制,为防治职业人群锰中毒提供研究基础。方法:1.MN9D细胞在雷帕霉素（0.1μg/ml）预处理1h后分别暴露1.2和2.4m M锰24h。然后,观察细胞形态、台盼蓝染色计数活细胞数量、Annexin V/PI双染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡率、Western blot分析MN9D细胞caspase-3激活程度。2.MN9D细胞在雷帕霉素RAP（0.1μg/ml）/mTOR激动剂MHY（1μM）预处理1h后暴露1.2 m M锰24h。然后,观察细胞形态、台盼蓝染色计数活细胞数量、Annexin V/PI双染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡率、western blot分析MN9D细胞caspase-3激活和mTOR相关蛋白变化。结果:1.与对照组相比,锰以浓度依赖的方式诱导MN9D细胞活性下降和形态改变,凋亡率逐渐升高,cleaved-caspase-3蛋白表达量也逐渐升高,差异有统计学意义（P<0.0... 

【文章来源】：遵义医科大学贵州省

【文章页数】：56 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

不同时间和浓度锰对MN9D细胞活力的影响

遵义医学院硕士学位论文 李光辉concentration(P<0.05，在两个时间段与对照组相比)数据用 表示（n=3）。2.2 雷帕霉素削弱锰诱导 MN9D 细胞活性下降和形态改变由图 2 显示，MN9D 细胞在 1.2 和 2.4mM 锰处理 24h 后，与对照组相比，细胞活性急剧下降（图 A），细胞形态皱缩变圆（图 B），而与雷帕霉素(Rap)联合处理后这些现象得到了明显缓解。由此可见，锰明显导致 MN9D 细胞受损死亡，而雷帕霉素逆转锰致细胞存活率下降。x s

遵义医学院硕士学位论文 李光辉数据用 表示（n=3）。avs Control，P<0.05；bvs 1.2 mM Mn，P<0.05；cvs 2.4 mM Mn，P<0.05。2.3 雷帕霉素抵抗锰诱导 MN9D 细胞凋亡采用 Annexin V/PI 双染流式细胞术检测各分组 MN9D 细胞凋亡。如图 3 所示，随着锰染毒浓度的逐渐增高，细胞的凋亡率也随之增加。而与雷帕霉素(Rap)联合处理后凋亡率则明显下降，差异有统计学意义（P<0.05）。由此可见，雷帕霉素对锰诱导的细胞凋亡有明显的抑制作用。（图 4）x s


本文编号：2957786