产志贺毒素大肠杆菌O26多重双启动寡核苷酸引物-PCR检测方法的建立

发布时间：2021-03-08 09:47

　　为建立一种三重DPO-PCR方法用于食品样品中的产志贺毒素大肠杆菌O26的检测。以志贺毒素stx1和stx2、O抗原基因wzx O26特异性和实际检测效果,设计引物,构建三重DPO-PCR反应体系,进行特异性、灵敏度、模拟样品验证和实际样品验证。结果表明,三对DPO引物对退火温度不敏感,在49～69℃之间均能发生扩增,且引物之间干扰较小,具有较高的特异性,除目的基因外非目标细菌均无扩增条带出现,纯菌灵敏度检测表明,三重DPO-PCR方法对O26的最低检测限为3.8×10³ cfu/g。在模拟样品和实际样品中具有良好的检测效果。本研究基于DPO引物构建的三重DPO-PCR方法具有效率高,特异性强,不受退火温度限制等优点,可用于食品样品中产志贺毒素大肠杆菌O26的快速准确检测提供一种高效的辅助检测方法。 

【文章来源】：现代食品科技. 2020,36(04)北大核心

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

DPO PCR扩增结果

DPO-PCR特异性检测

2.3 DPO-PCR退火温度敏感性由图3可知，DPO引物在49.0℃、49.4℃、50.4℃、52.0℃、54.2℃、57.2℃、60.8℃、63.8℃、66.0℃、67.6℃、68.6℃和69.0℃均可以扩增出三条目的条带stx1 308 bp、stx2 240 bp、wzx O26 472 bp，表明DPO引物的退火温度范围较宽，不易受温度变化影响(图3a)；而传统PCR引物最佳的退火温度为57.2℃，易受退火温度变化的影响，在扩增反应前需要进行退火温度的优化(图3b)。

【参考文献】：
期刊论文
[1]基于双启动寡聚核苷酸引物的PCR技术及其研究应用[J]. 苏琰,李融,黎华.  基因组学与应用生物学. 2018(07)
[2]非O157产志贺毒素大肠埃希菌研究进展[J]. 巴鹏斌,孟琼,白向宁,艾永循,熊衍文.  中国人兽共患病学报. 2017(02)
[3]食源性致病菌PCR检测技术研究进展[J]. 胡金强,雷俊婷,景建洲,孙新城,高辉,耿尧,章银良,董彩文,姜春鹏.  轻工学报. 2016(03)
[4]金黄色葡萄球菌DPO-PCR快速检测方法的建立与应用[J]. 李丹丹,徐义刚,邱索平,王昱,高会江,高慎阳.  食品与生物技术学报. 2016(04)
[5]副溶血弧菌DPO-PCR检测方法的建立[J]. 李丹丹,徐义刚,王昱,邱索平,高会江,高慎阳.  食品与发酵工业. 2015(11)
[6]肠致病性大肠杆菌DPO-PCR快速检测方法的建立[J]. 李丹丹,徐义刚,陈文慧,邱索平,高慎阳,李一经.  中国预防兽医学报. 2015(07)
[7]霍乱弧菌DPO-PCR特异性检测方法的建立与应用[J]. 徐义刚,李丹丹,吴岩,刘忠梅,魏冬旭,李苏龙.  中国兽医学报. 2014(08)
[8]基于DPO引物特异性检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的PCR方法[J]. 徐义刚,李丹丹,刘忠梅,吴岩,李苏龙.  中国人兽共患病学报. 2014(05)
[9]基于DPO引物的空肠弯曲菌PCR检测方法的建立与初步应用[J]. 徐义刚,李丹丹,刘忠梅,吴岩,魏冬旭,李苏龙.  中国预防兽医学报. 2014(04)
[10]O26等产志贺毒素的6种血清型大肠杆菌的暴发流行情况及检测研究现状[J]. 夏诗琪,赖卫华,刘道峰,崔希.  食品科学. 2014(17)



本文编号：3070849