三氯化铝致成骨细胞凋亡的Fas-线粒体信号转导机制

发布时间：2017-04-15 17:12

  本文关键词：三氯化铝致成骨细胞凋亡的Fas-线粒体信号转导机制，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本实验以体外培养的SD乳鼠颅骨成骨细胞(OB)第3代为实验对象,依据三氯化铝(AlCl3)对OB的半数抑制浓度(IC50),设立4个实验组,即空白对照组(CG)、低剂量染铝组(LG,1/20IC50)、中剂量染铝组(MG,1/10 IC50)、高剂量染铝组(HG,1/5 IC50);向各组培养液中加入三氯化铝(AlCl3·6H2O)溶液,其终浓度分别为0 mg/mL、0.06 mg/mL、0.12 mg/mL、0.24 mg/mL,培养24h。应用AO/EB双重荧光染色法检测OB凋亡形态,并统计凋亡率;qRT-PCR法检测OB Fas、FasL、FADD、Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3 mRNA表达;Western blot检测OB Fas、FasL、FADD、CytC、Bid和tBid蛋白表达;Caspase活性检测试剂盒检测OB Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3活性。旨在探讨三氯化铝致OB凋亡的Fas-线粒体信号转导机制。实验结果表明:(1)染铝组OB均可见细胞核呈现点状亮绿色的早期凋亡细胞,细胞核染为亮橘红色的晚期凋亡细胞,与细胞核为红色的坏死细胞;随染铝剂量的增加,OB凋亡数目增多,染铝组OB凋亡率显著高于CG(P0.01),表明AlCl3可诱导OB凋亡。(2)染铝组OB Fas、FasL、FADD mRNA及蛋白表达量,Caspase-8 mRNA表达量及Caspase-8活性均显著高于CG(P0.05;P0.01),说明Fas/FasL信号通路参与了AlCl3诱导的OB凋亡。(3)染铝组OB胞浆中CytC蛋白表达量、Caspase-9 mRNA表达量及Caspase-9活性均显著高于CG(P0.01),说明线粒体信号通路参与了AlCl3诱导的OB凋亡。(4)染铝组OB Bid mRNA及蛋白表达水平、tBid的蛋白表达水平、Caspase-3 mRNA表达量及活性均极显著高于CG(P0.01),说明AlCl3通过Fas和线粒体信号通路激活Caspase3诱导OB凋亡,Fas凋亡信号转导通路可能通过活化Bid作用于线粒体,导致线粒体凋亡信号激活。
【关键词】：三氯化铝 大鼠 成骨细胞 Fas/FasL信号通路 线粒体信号通路
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要8-9
• 英文摘要9-10
• 1 前言10-15
• 1.1 机体中铝的来源、代谢及生物学毒性10-11
• 1.2 铝与代谢性骨病11
• 1.3 铝与成骨细胞11-12
• 1.4 铝与细胞凋亡12-14
• 1.4.1 铝与Fas信号转导通路12-13
• 1.4.2 铝与线粒体信号转导通路13-14
• 1.4.3 Fas-线粒体双信号转导通路在细胞凋亡中的作用14
• 1.5 研究目的和意义14-15
• 2 材料与方法15-21
• 2.1 实验仪器与试剂15-16
• 2.1.1 实验仪器15
• 2.1.2 试剂15-16
• 2.2 大鼠颅骨OB的培养及处理16-17
• 2.2.1 OB的提取16-17
• 2.2.2 OB的培养及处理17
• 2.3 检测项目与方法17-20
• 2.3.1 OB凋亡形态观察及凋亡指数观测17-18
• 2.3.2 OB Fas、Fas L、FADD、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3、BidmRNA检测18-20
• 2.3.3 OB Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3 活性的检测20
• 2.3.4 OB Fas、Fas L、FADD、Bid、tBid、CytC蛋白检测20
• 2.4 实验数据的分析及统计20-21
• 3 实验结果21-27
• 3.1 OB AO/EB双荧光染色结果及凋亡率21-22
• 3.2 AlCl_3对OB Fas、Fas L、FADD mRNA表达的影响22
• 3.3 AlCl_3对OB Fas、Fas L、FADD蛋白表达的影响22-23
• 3.4 AlCl_3对OB Bid mRNA、Bid、tBid蛋白表达的影响23-25
• 3.4.1 AlCl_3对OB Bid mRNA表达的影响23-24
• 3.4.2 AlCl_3对Bid、t Bid蛋白表达的影响24-25
• 3.5 AlCl_3对OB胞浆中Cyt C蛋白表达的影响25
• 3.6 AlCl_3对OB Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达的影响25-26
• 3.7 AlCl_3对OB Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3 活性的影响26-27
• 4 讨论27-31
• 4.1 AlCl_3对OB凋亡形态的影响27-28
• 4.2 AlCl_3对OB Fas信号转导通路的影响28-29
• 4.3 AlCl_3对OB线粒体信号转导通路的影响29
• 4.4 AlCl_3对OB Fas-线粒体信号转导通路的影响29-31
• 4.4.1 AlCl_3对Bid表达的影响29-30
• 4.4.2 AlCl_3对Caspase-3 mRNA表达及活性的影响30-31
• 5 结论31-32
• 致谢32-33
• 参考文献33-40
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文40

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

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3 路绪文,尤光普;含铝的药物不宜长期服用[J];北京军区医药;1995年01期

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5 张立娟;雷涛;张秀珍;;淫羊藿甙对成骨细胞凋亡的影响[J];同济大学学报(医学版);2008年01期

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1 曲志军;饮用水中铝的控制措施研究[D];哈尔滨工业大学;2007年

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本文编号：308858