Ⅰ组mGluR在氟砷联合染毒致海马神经元突触可塑性损伤中的调控作用

发布时间：2017-04-16 16:22

  本文关键词：Ⅰ组mGluR在氟砷联合染毒致海马神经元突触可塑性损伤中的调控作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的本研究探讨氟砷联合染毒对原代培养海马神经元生长、突触可塑性的影响,从Ⅰ组代谢型谷氨酸受体蛋白表达水平探讨氟砷联合暴露损害学习记忆的分子机制,为地方性氟砷联合中毒的防治提供理论依据。方法1原代培养的新生SD大鼠海马神经元分别暴露于0.00、0.10、0.20、0.40、0.80μg/ml氟化钠和0.00、0.05、0.10、0.20、0.40μg/ml亚砷酸钠,染毒24h。采用倒置显微镜和扫描电镜观察海马神经元形态变化,CCK8检测试剂盒检测细胞活性,LDH检测试剂盒检测细胞培养上清液中的乳酸脱氢酶(lactate dehydrtogenase,LDH)活力,Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡率,Western-blot方法检测海马神经元中SYN和GAP-43蛋白的表达水平。2原代培养的新生SD大鼠海马神经元在氟砷联合染毒(0.40μg/ml氟化钠+0.10μg/ml亚砷酸钠)的同时分别给予三种谷氨酸受体抑制剂D-AP5(NMDAR抑制剂)、LY367385(m Glu R1抑制剂)、MPEP(m Glu R5抑制剂)进行干预,作用24h。采用CCK8检测试剂盒检测细胞活性,Western-blot方法检测海马神经元中NR2B、m Glu R1α、m Glu R5及突触相关蛋白SYN、GAP-43的蛋白表达水平。结果1氟染毒组和砷染毒组大鼠原代培养海马神经元的细胞存活率、神经网络丰富型神经元的构成比随着氟化钠和亚砷酸钠染毒浓度的增加而逐渐降低。2氟染毒组和砷染毒组大鼠原代培养海马神经元的细胞凋亡率、细胞培养上清液中的LDH活力随着氟化钠和亚砷酸钠染毒浓度的增加而逐渐升高。3氟染毒组大鼠原代培养海马神经元中SYN蛋白的表达水平随着氟化钠染毒浓度的增加先升高后降低;而GAP-43蛋白的表达水平随着氟化钠染毒浓度的增加逐渐降低。4砷染毒组大鼠原代培养海马神经元中SYN和GAP-43蛋白的表达水平随着亚砷酸钠染毒浓度的增加而逐渐降低。5与空白对照组比较,氟砷联合染毒组和不同浓度的三种谷氨酸受体抑制剂组(D-AP5组、LY367385组、MPEP组)大鼠原代培养海马神经元的细胞存活率和相应谷氨酸受体蛋白(NR2B、m Glu R1α、m Glu R5)的表达水平均显著下降(P0.05);与氟砷联合染毒组比较,不同浓度的三种谷氨酸受体抑制剂组大鼠原代培养海马神经元的细胞存活率和相应谷氨酸受体蛋白(NR2B、m Glu R1α、m Glu R5)的表达水平升高(P0.05)。且随着谷氨酸受体抑制剂浓度的增加细胞存活率和相应蛋白表达水平依次升高。6与空白对照组比较,氟砷联合染毒组、50μM D-AP5组、25μM LY367385组、20μM MPEP组海马神经元中SYN和GAP-43的蛋白表达水平均显著下降(P0.01);与氟砷联合染毒组比较,50μM D-AP5组、25μM LY367385组、20μM MPEP组海马神经元中SYN和GAP-43的蛋白表达水平均显著升高(P0.05)。结论1氟、砷染毒可降低原代培养海马神经元的生存活性、LDH活力,诱导原代培养海马神经元凋亡,并通过降低SYN和GAP-43蛋白表达而损伤其突触可塑性。2三种谷氨酸受体抑制剂均可缓解氟砷联合染毒对海马神经元生存活性的降低;氟砷联合染毒所致的原代培养海马神经元突触可塑性损伤是通过降低Ⅰ组代谢性谷氨酸受体的表达来调控的,Ⅰ组m Glu R的表达水平降低可引起其下游的突触相关蛋白SYN和GAP-43表达水平降低,继而造成海马神经元突触可塑性性损伤。
【关键词】：氟 砷 氟砷联合染毒 突触可塑性 代谢型谷氨酸受体 学习记忆
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略表10-11
• 引言11-13
• 第1章 氟和砷对原代培养海马神经元突触可塑性的影响13-38
• 1.1 材料与方法14-23
• 1.1.1 材料14-19
• 1.1.2 方法19-23
• 1.2 结果23-33
• 1.2.1 海马神经元纯度的检测结果23
• 1.2.2 海马神经元的形态学观察结果23-26
• 1.2.3 海马神经元的细胞活性测定结果26-27
• 1.2.4 海马神经元培养上清液中LDH活力的检测结果27-29
• 1.2.5 海马神经元凋亡率的比较29-31
• 1.2.6 海马神经元SYN和GAP-43蛋白表达水平的测定结果31-33
• 1.3 讨论33-35
• 1.3.1 氟染毒对原代培养海马神经元的影响33-34
• 1.3.2 砷染毒对原代培养海马神经元的影响34-35
• 1.4 小结35
• 参考文献35-38
• 第2章 Ⅰ组mGluR在氟砷联合染毒致海马神经元突触可塑性损伤中的调控作用38-58
• 2.1 材料与方法39-47
• 2.1.1 材料39-44
• 2.1.2 方法44-47
• 2.2 结果47-52
• 2.2.1 各组细胞存活率测定结果47-48
• 2.2.2 三种谷氨酸受体抑制剂组海马神经元中的相应受体表达水平48-51
• 2.2.3 三种谷氨酸受体抑制剂组海马神经元中SYN和GAP-43的蛋白表达水平51-52
• 2.3 讨论52-54
• 2.4 小结54-55
• 参考文献55-58
• 第3章 综述 突触可塑性相关蛋白的研究进展突触可塑性相关蛋白的研究进展58-68
• 3.1 突触素59-61
• 3.1.1 突触素概述59
• 3.1.2 突触素与突触可塑性59-61
• 3.2 生长相关蛋白-4361-62
• 3.2.1 生长相关蛋白-43概述61
• 3.2.2 生长相关蛋白-43与突触可塑性61-62
• 3.3 突触后致密蛋白-9562-64
• 3.3.1 突触后致密蛋白-95概述62-63
• 3.3.2 突触后致密蛋白-95与突触可塑性63-64
• 参考文献64-68
• 结论68-69
• 致谢69-70
• 导师简介70-71
• 作者简介71-72
• 学位论文数据集72

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 廖敏,刘能保,张敏海,李宏莲,刘少纯,刘向前,张伟;慢性捆绑应激致大鼠学习记忆受损及海马神经元突触素和突触后致密物95表达的变化[J];华中科技大学学报(医学版);2003年04期

2 张琳;刘广义;;骨髓间充质干细胞移植在脑缺血损伤中的作用与生长相关蛋白-43表达的相关性[J];中国康复;2011年03期

3 何雨;杨春荣;宋世洋;;血管性痴呆大鼠PSD-95变化机制的研究[J];中国老年学杂志;2009年20期

4 樊留博;王韵;马利中;;脑缺血后生长相关蛋白43基因表达的变化与脑缺血后神经再生的关系[J];中华中医药学刊;2011年10期

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本文编号：311211