甘肃河西走廊酿酒葡萄产区霉菌污染现状及产毒分析

发布时间：2017-04-16 22:12

  本文关键词：甘肃河西走廊酿酒葡萄产区霉菌污染现状及产毒分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本实验以甘肃河西走廊具有代表性的四家葡萄酒厂酿酒葡萄种植基地为研究对象，它们分别为甘肃紫轩酒业有限公司嘉峪关市基地，甘肃祁连酒业有限公司张掖市基地，甘肃国风酒业有限公司张掖市基地，甘肃莫高酒业武威市基地。首先对其进行霉菌筛查及分离纯化，其次将筛选出的优势菌株进行18S rDNA测序，并使用高效液相色谱(HPLC)测定霉菌次级代谢产物及最适产毒条件分析。最后对葡萄酒中霉菌毒素进行检测，所得到结果如下： 1.从甘肃河西走廊酿酒葡萄产区共分离得到10个菌属的55株霉菌。其中青霉属16株，曲霉属12株，毛霉属8株，交链孢霉属6株，黑粉菌属4株，镰孢霉属3株，，根霉属3株，丝核菌属1株，头孢霉属1株，聚端孢霉属1株。对四家葡萄种植园的不同酿酒葡萄品种和不同组织进行霉菌统计，发现酿酒红葡萄比白葡萄品种抗霉菌污染能力较强，酿酒葡萄果实比茎杆和叶片更易受到霉菌的污染，且四家葡萄种植园霉菌污染差异不是十分显著。 2.试验鉴定出四株优势霉菌分别为青霉属的扩展青霉（Penicillium expansum）和黄绿青霉（Penicillium decumbens）；曲霉属的杂色曲霉（Aspergullus versicolor）和烟曲霉（Aspergillus fumigatus）。 3.对扩展青霉M18菌株进行紫外照射可产生蓝绿色荧光，初步判定可产生毒素。使用HPLC法检测验证该菌株可产生展青霉素，证明紫外照射初步判断菌株产毒方法的可行性。 4.研究不同培养时间、温度和pH值对扩展青霉产生展青霉素的影响，通过正交实验发现，产生展青霉素的最适条件：pH值为6.0、培养温度为25℃和培养时间为9d，并且培养时间与温度对产生展青霉素的影响较为明显。 5.对小型酿酒试验的10份葡萄酒样品进行展青霉素检测，其中7份呈阳性、3份呈阴性，阳性酒样含有5.1～25.2μg/L的展青霉素。红葡萄酒比白葡萄酒更容易受到展青霉素污染且陈酿葡萄酒的展青霉素含量相对较低。
【关键词】：河西走廊 酿酒葡萄 产毒霉菌 展青霉素
【学位授予单位】：甘肃农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R155
【目录】：

• 摘要2-3
• ABSTRACT3-4
• 目录4-6
• 文献综述6-20
• 1.1 真菌概况6-7
• 1.1.1 丝状真菌6
• 1.1.2 青霉菌6
• 1.1.3 曲霉菌6-7
• 1.2 霉菌毒素7-12
• 1.3 霉菌及毒素污染现状12-15
• 1.4 真菌的分类方法研究15-16
• 1.4.1 形态特征分类15
• 1.4.2 分子生物学分类方法15-16
• 1.5 霉菌毒素检测方法的研究16-18
• 1.6 甘肃河西走廊酿酒葡萄产区概况18-20
• 1.6.1 河西走廊介绍18
• 1.6.2 河西走廊气候条件18-19
• 1.6.3 河西走廊酿酒葡萄品种19-20
• 1．前言20-21
• 2．材料与方法21-29
• 2.1 材料21-23
• 2.1.1 试验材料21-22
• 2.1.2 培养基22
• 2.1.3 主要试剂22
• 2.1.4 仪器设备22-23
• 2.2 试验方法23-28
• 2.2.1 霉菌的分离纯化23-24
• 2.2.2 霉菌的菌株鉴定24-25
• 2.2.3 菌株产毒分析与培养25
• 2.2.4 高效液相色谱法测定菌株代谢产物25-27
• 2.2.5 产毒条件分析27
• 2.2.6 高效液相色谱法测定葡萄酒中展青霉素27-28
• 2.3 数据分析28-29
• 3．结果与分析29-40
• 3.1 河西走廊酿酒葡萄产区相关霉菌的分离29-30
• 3.2 河西走廊酿酒葡萄污染霉菌统计30-32
• 3.3 霉菌的鉴定32-33
• 3.3.1 优势霉菌的形态学鉴定32
• 3.3.2 PCR 产物电泳图32-33
• 3.3.3 分子生物学鉴定结果33
• 3.4 产毒霉菌初步分析33-34
• 3.5 标准曲线绘制34
• 3.6 加标回收率实验34
• 3.7 菌株代谢产物的 HPLC 法测定34-35
• 3.8 不同条件对扩展青霉产毒影响35-37
• 3.8.1 pH 值对展青霉素的影响35-36
• 3.8.2 温度对展青霉素的影响36
• 3.8.3 时间对展青霉素的影响36-37
• 3.9 产毒条件正交实验37-38
• 3.10 葡萄酒中展青霉素的测定38-40
• 4．讨论40-43
• 4.1 河西走廊酿酒葡萄产区污染霉菌分析40
• 4.2 菌株产毒分析40-41
• 4.3 扩展青霉产毒分析41
• 4.4 葡萄酒中展青霉素的研究41-43
• 5．结论43-44
• 参考文献44-49
• 致谢49-50
• 作者简介50-51
• 导师简介51-52
• 附图52-53

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