副溶血性弧菌质粒DNA参考物质的研制

发布时间：2021-04-28 04:26

　　目的研制一种质粒DNA参考物质,包含副溶血性弧菌检测常用的目的靶基因——耐热直接溶血素（tdh）、不耐热直接溶血素（tlh）、和耐热相关溶血素（trh）、跨膜转录激活蛋白（toxR）基因序列,为副溶血性弧菌病原体的快速鉴定提供相关技术支持。方法使用人工DNA合成技术合成所需目的基因,构建重组质粒,并对其纯度、均匀性、稳定性、标准值、不确定度及在实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）中的应用进行评价。结果质粒DNA参考物质的纯度高,均匀性、稳定性良好,可用于检测副溶血性弧菌的的荧光定量PCR检验,与传统的基因组核酸参考品有可比性。结论该质粒DNA参考物质适用于以tdh、trh、tlh及toxR基因为靶标实时荧光定量PCR检测,为病原体的定性定量检测提供了技术支持,保证了检测结果的可靠性和可比性。 

【文章来源】：分子诊断与治疗杂志. 2020,12(11)

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 质粒构建
    1.2 纯度检验
    1.3 均匀性研究
    1.4 稳定性研究
    1.5 标准值的确定
    1.6 标准值的不确定度评估
    1.7 q PCR实验
    1.8 标准曲线的建立
    1.9 统计学分析
2 结果
    2.1 质粒序列的准确性验证
    2.2 纯度验证
    2.3 均匀性检验
    2.4 稳定性检验
    2.5 标准值的确定
    2.6 标准值的不确定度评估
    2.7 q PCR标准曲线的建立
    2.8 质粒DNA参考物质与副溶血性弧菌基因组DNA(g DNA）的可替代性研究
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3164798