细胞自噬在矽肺肺纤维化发生中的作用研究
发布时间：2021-04-30 04:16
【研究目的】观察染矽尘大鼠矽肺发生不同时期肺组织自噬水平的变化,探讨自噬在矽肺发生中的作用及其机制。【研究方法】通过建立矽肺大鼠模型,观察自噬在矽肺发生不同时间点的变化。SPF级Wistar雄性大鼠72只,8周龄,被随机分为矽肺模型组和溶剂对照组。模型组大鼠采用非暴露式气管滴注法一次性给予SiO2悬浮液建立矽肺模型,溶剂对照组大鼠给予等量0.9%的Nacl溶液。每天观察大鼠一般情况并记录体重。于造模后1、7、14、21、28、60天各处死6只大鼠,取肺组织,称量肺湿重,计算肺脏器系数;通过HE和Masson染色观察肺组织病理变化和纤维化程度;利用酶联免疫吸附（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法检测肺组织匀浆中转化生长因子β（TGF-β）、白介素1（IL-1）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的水平;利用Western blot法检测肺组织中自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（Microtubules associated protein 1 light chain 3,LC3）和酵母自噬相关基因6（Beclin1）的表达水...
【文章来源】：济南大学山东省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
研究生导师及课题指导小组成员简介
摘要
Abstract
主要符号表
前言
第一部分 染矽尘大鼠不同时期肺组织纤维化及自噬相关蛋白的变化
1.1 实验材料
1.1.1 主要仪器及材料
1.1.2 主要试剂
1.1.3 主要试剂配制
1.1.4 实验动物
1.2 实验方法
1.2.1 动物分组及造模方法
1.2.2 大鼠肺组织样品的采集及处理
1.2.3 大鼠一般情况和肺组织系数
1.2.4 大鼠肺组织病理学检查
1.2.5 大鼠肺组织匀浆中TNF-α、IL-1 含量测定
1.2.6 大鼠肺组织匀浆中TGF-β含量测定
1.2.7 BCA蛋白浓度测定法测定肺组织蛋白浓度
1.2.8 大鼠肺组织LC3、Beclin1 蛋白检测
1.2.9 透射电镜观察大鼠肺组织自噬体
1.2.10 统计学分析
1.3 结果
1.3.1 两组大鼠一般情况和体重
1.3.2 两组大鼠肺脏湿重及脏器系数
1.3.3 两组大鼠肺脏大体解剖观察结果
1.3.4 两组大鼠肺组织HE染色观察结果
1.3.5 两组大鼠肺组织Masson染色观察结果
1.3.6 两组大鼠肺组织匀浆中IL-1 含量的比较
1.3.7 两组大鼠肺组织匀浆中TNF-α含量的比较
1.3.8 两组大鼠肺组织匀浆中TGF-β含量的比较
1.3.9 两组大鼠肺组织自噬相关蛋白LC3和Beclin1 表达水平的比较
1.3.10 两组大鼠肺组织透射电镜观察结果
1.4 小结
第二部分 细胞自噬在矽肺肺纤维化发生中的作用及机制研究
2.1 实验材料
2.1.1 主要仪器
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要试剂配制
2.1.4 实验动物
2.1.5 实验细胞
2.2 实验方法
2.2.1 动物分组及造模方法
2.2.2 大鼠肺组织样品的采集及处理
2.2.3 大鼠一般情况和肺组织系数
2.2.4 大鼠肺组织病理学检查
2.2.5 大鼠肺组织匀浆中TNF-α、IL-1 含量测定
2.2.6 大鼠肺组织匀浆中TGF-β含量测定
2.2.7 BCA蛋白浓度测定法测定肺组织蛋白浓度
2.2.8 大鼠肺组织LC3、Beclin1、α-SMA、Vimentin蛋白检测
2.2.9 A549 细胞和THP-1 细胞共培养体系的分组及染毒方法
2.2.10 A549 细胞和巨噬细胞存活率测定
2.2.11 巨噬细胞LC3、Beclin1和P62 蛋白检测
2.2.12 巨噬细胞上清液中TGF-β含量测定
2.2.13 A549 细胞α-SMA、Vimentin、E-cad蛋白检测
2.2.14 统计学分析
2.3 结果
2.3.1 利用Rapa和3-MA调控自噬后对染矽尘大鼠肺组织纤维化的影响
2.3.2 体外细胞观察自噬对A549 细胞EMT的影响
2.4 小结
讨论
结论
参考文献
致谢
附录
本文编号：3168822
【文章来源】：济南大学山东省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
研究生导师及课题指导小组成员简介
摘要
Abstract
主要符号表
前言
第一部分 染矽尘大鼠不同时期肺组织纤维化及自噬相关蛋白的变化
1.1 实验材料
1.1.1 主要仪器及材料
1.1.2 主要试剂
1.1.3 主要试剂配制
1.1.4 实验动物
1.2 实验方法
1.2.1 动物分组及造模方法
1.2.2 大鼠肺组织样品的采集及处理
1.2.3 大鼠一般情况和肺组织系数
1.2.4 大鼠肺组织病理学检查
1.2.5 大鼠肺组织匀浆中TNF-α、IL-1 含量测定
1.2.6 大鼠肺组织匀浆中TGF-β含量测定
1.2.7 BCA蛋白浓度测定法测定肺组织蛋白浓度
1.2.8 大鼠肺组织LC3、Beclin1 蛋白检测
1.2.9 透射电镜观察大鼠肺组织自噬体
1.2.10 统计学分析
1.3 结果
1.3.1 两组大鼠一般情况和体重
1.3.2 两组大鼠肺脏湿重及脏器系数
1.3.3 两组大鼠肺脏大体解剖观察结果
1.3.4 两组大鼠肺组织HE染色观察结果
1.3.5 两组大鼠肺组织Masson染色观察结果
1.3.6 两组大鼠肺组织匀浆中IL-1 含量的比较
1.3.7 两组大鼠肺组织匀浆中TNF-α含量的比较
1.3.8 两组大鼠肺组织匀浆中TGF-β含量的比较
1.3.9 两组大鼠肺组织自噬相关蛋白LC3和Beclin1 表达水平的比较
1.3.10 两组大鼠肺组织透射电镜观察结果
1.4 小结
第二部分 细胞自噬在矽肺肺纤维化发生中的作用及机制研究
2.1 实验材料
2.1.1 主要仪器
2.1.2 主要试剂
2.1.3 主要试剂配制
2.1.4 实验动物
2.1.5 实验细胞
2.2 实验方法
2.2.1 动物分组及造模方法
2.2.2 大鼠肺组织样品的采集及处理
2.2.3 大鼠一般情况和肺组织系数
2.2.4 大鼠肺组织病理学检查
2.2.5 大鼠肺组织匀浆中TNF-α、IL-1 含量测定
2.2.6 大鼠肺组织匀浆中TGF-β含量测定
2.2.7 BCA蛋白浓度测定法测定肺组织蛋白浓度
2.2.8 大鼠肺组织LC3、Beclin1、α-SMA、Vimentin蛋白检测
2.2.9 A549 细胞和THP-1 细胞共培养体系的分组及染毒方法
2.2.10 A549 细胞和巨噬细胞存活率测定
2.2.11 巨噬细胞LC3、Beclin1和P62 蛋白检测
2.2.12 巨噬细胞上清液中TGF-β含量测定
2.2.13 A549 细胞α-SMA、Vimentin、E-cad蛋白检测
2.2.14 统计学分析
2.3 结果
2.3.1 利用Rapa和3-MA调控自噬后对染矽尘大鼠肺组织纤维化的影响
2.3.2 体外细胞观察自噬对A549 细胞EMT的影响
2.4 小结
讨论
结论
参考文献
致谢
附录
本文编号：3168822
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