猪骨骼肌肌球蛋白轻链激酶（skMLCK）基因CDS序列测定及在C2C12细胞中表达

发布时间：2017-04-19 22:38

  本文关键词：猪骨骼肌肌球蛋白轻链激酶（skMLCK）基因CDS序列测定及在C2C12细胞中表达，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 为测定获得猪骨骼肌肌球蛋白轻链激酶（skeletal muscle Myosin Light ChainKinase,skMLCK）基因的CDS序列，并构建猪skMLCK基因的真核表达载体，猪skMLCK基因在C2C12细胞中表达后，探索其在肌纤维生长发育中的作用和对猪肉性状的影响。 方法 参考NCBI上的信息，通过多种生物学软件分析，分2段进行猪skMLCK基因的全长CDS序列克隆、拼接、测序、合成。构建猪skMLCK基因的真核表达载体，利用脂质体介导的外源基因转移技术进行细胞转染。通过细胞培养和筛选，获得稳定表达猪skMLCK的细胞株。通过荧光显微镜，检测猪skMLCK基因在C2C12细胞中表达。利用Real-Time PCR技术，检测有关基因的mRNA表达。 结果 获得了全长1851bp的猪skMLCK基因的CDS序列。获得了猪skMLCK基因的真核表达载体pEGFP-N1-skMLCK。成功筛选出表达猪skMLCK的C2C12稳定细胞株。skMLCK基因和MHC2B基因mRNA表达上调，CFL2b和MEF2C基因mRNA表达下调。skMLCK-CFL2b基因mRNA表达的关系为极显著负相关(P＜0.01)；skMLCK-MHC2B基因mRNA表达的关系为极显著正相关(P＜0.01)；skMLCK-MEF2C基因的mRNA表达关系为极显著负相关(P＜0.01)。 结论 猪skMLCK基因的表达，明显地影响了MHC2B、CFL2b、MEF2C基因的mRNA表达。猪skMLCK基因的表达与肌纤维的生长发育有密切关系。本实验结果为进一步研究猪skMLCK基因在肌纤维生长发育中的作用奠定基础，，为通过基因水平来改善与评价猪肉质性状提出了一个新方向。
【关键词】：猪 skMLCK CDS 测序 细胞表达
【学位授予单位】：辽宁医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R155.5
【目录】：

• 中文论著摘要4-6
• 英文论著摘要6-8
• 英文缩略语表8-9
• 前言9-10
• 实验材料与方法10-14
• 实验结果14-28
• 讨论28-30
• 结论30-32
• 本研究创新性的自我评价32-33
• 参考文献33-35
• 综述35-41
• 参考文献39-41
• 在学期间科研成绩41-42
• 致谢42-43
• 个人简介43-44

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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本文编号：317293