婴幼儿食品中呕吐型蜡样芽孢杆菌的鉴别与多位点序列分析

发布时间：2017-04-20 03:17

  本文关键词：婴幼儿食品中呕吐型蜡样芽孢杆菌的鉴别与多位点序列分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus,简称Bc)是一种在自然环境中广泛存在的食源性致病菌,极易造成食品污染,引起食物中毒的Bc分为呕吐型和腹泻型两类,以呕吐型危害最大,会导致人的呕吐、腹泻、头晕、乏力等症状出现,严重时甚至致死。本研究从市场采购了101分婴幼儿食品,从中检测分离出了155株蜡样芽孢杆菌,通过PCR方法鉴别呕吐型菌株,并对呕吐型菌株进行生化特征和表型研究。通过随机扩增多态性DNA技术(RAPD)筛选出带型与标准株不同的呕吐型分离株进行ilvD序列分析,进一步筛选呕吐型株分离株进行多位点序列分型(MLST),得到等位基因型和序列型ST,并对比、分析MLST数据库中来自于五十多个国家提交的1707株蜡样芽孢杆菌群分离株,共989个ST型别的数据信息来研究蜡样芽孢杆菌的进化特点和遗传特性。101份样品中蜡样芽孢杆菌的检出率为98%,从155个分离株中鉴别出43株呕吐型菌株,呕吐型分离株占Bc分离株总数的27.7%。Bc在婴幼儿食品中的检出率极高,只有少部分没有被污染,说明我国婴幼儿辅食存在潜在的安全隐患,特别是大量高毒力呕吐型菌株的出现。RAPD和ilvD序列分析筛选出11株呕吐型分离株进行多位点序列分型,鉴定出9株呕吐型菌株中常见的ST26型,并新发现了一种新的ST989型两株。ST989与ST26型只有一个等位基因的差异,eburst算法上均属于同一个group。MLST数据库中的呕吐型菌株分布在三个group里,且在亚洲地区检出率较高,说明呕吐型蜡样芽孢杆菌在进化上还是比较保守的。研究菌株的进化关系和不同地域分布,可以了解其演化特点和进化规律,预测疾病与中毒事件的爆发。
【关键词】：蜡样芽孢杆菌 食物中毒 呕吐型 鉴别 多位点序列分型 进化
【学位授予单位】：武汉轻工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R155.5
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 前言9-17
• 1.立题依据及意义9-10
• 2.文献综述10-17
• 2.1 食源性微生物污染现状10
• 2.2 蜡样芽孢杆菌10-13
• 2.2.1 蜡样芽孢杆菌性状形态10-11
• 2.2.2 蜡样芽孢杆菌污染11-12
• 2.2.3 蜡样芽孢杆菌群12
• 2.2.4 蜡样芽孢杆菌致病基因12-13
• 2.3 分子分型研究13-17
• 2.3.1 聚合酶链反应13-14
• 2.3.2 随机扩增多态性DNA技术14
• 2.3.3 扩增片段长度多态性分子分型14
• 2.3.4 脉冲场凝胶电泳14-15
• 2.3.5 多位点序列分型15-17
• 材料与方法17-24
• 1.实验材料17-19
• 1.1 标准株来源与特征17
• 1.2 主要试剂17
• 1.3 培养基和试剂的配置17-18
• 1.4 主要仪器18-19
• 2.实验方法19-24
• 2.1 样品中分离和鉴定蜡样芽孢杆菌19
• 2.1.1 采集样品19
• 2.1.2 检测分离蜡样芽孢杆菌19
• 2.2 呕吐型蜡样芽孢杆菌的检测与筛选19-21
• 2.2.1 PCR鉴别呕吐型蜡样芽孢杆菌19-20
• 2.2.2 RAPD筛选出呕吐型菌株20-21
• 2.3 呕吐型蜡样芽孢杆菌多位点序列分型21-22
• 2.4 蜡样芽孢杆菌的生理生化试验22-24
• 2.4.1 温度生长试验22
• 2.4.2 淀粉水解试验22
• 2.4.3 溶血试验22-23
• 2.4.4 水杨苷水解23-24
• 结果与分析24-46
• 1 婴幼儿食品样品中蜡样芽孢杆菌检测与分离24-28
• 1.1 蜡样芽孢杆菌显微特征与菌落形态24-25
• 1.2 蜡样芽孢杆菌检出情况25-28
• 2 呕吐型蜡样芽孢杆菌鉴定与筛选结果28-31
• 2.1 PCR鉴别呕吐型菌株28-30
• 2.2 RAPD筛选呕吐型菌株30-31
• 3 多位点序列分型结果与分析31-43
• 3.1 MLST分型结果31
• 3.2 数据分析31-43
• 3.2.1 实验室菌株分型结果分析31-33
• 3.2.2 MLST数据库呕吐型Bc分析33-38
• 3.2.3 MLST数据库韦氏芽孢杆菌分布情况分析38-40
• 3.2.4 MLST数据库Bc group分布情况分析40-43
• 4 生理生化试验结果43-46
• 结论与讨论46-48
• 参考文献48-51
• 致谢51

【参考文献】

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本文编号：317795