羟基多氯联苯对UGTs的抑制及机制研究

发布时间：2021-05-22 19:19

　　目的:多氯联苯属于持久性有机污染物,在环境和人体中广泛存在,已有研究表明多氯联苯对机体有多种毒性作用。多氯联苯进入机体内会迅速代谢为羟基多氯联苯,OH-PCBs的浓度占人体PCBs总水平的10-30%,往往高于许多单个PCB同系物,是多氯联苯产生毒性的重要物质基础,因此,我们阐述羟基多氯联苯的毒性机制更有意义。尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶（UGTs）是重要的II相代谢酶,能代谢体内多种内源性小分子（如雌激素、胆汁酸、胆红素等）,维持机体正常的生理平衡。本研究旨在探究羟基多氯联苯对多种尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶亚型活性的抑制作用,试图从代谢毒理学角度阐明羟基多氯联苯的毒性机制。方法:模拟体内化合物的代谢环境,选取35种代表性的羟基多氯联苯和9种主要人类UGTs（UGT1A1、1A3、1A6、1A7、1A8、1A9、1A10、2B7和2B17）作为实验组,溶剂二甲基亚砜作为实验的空白对照,以重组UGTs催化4-甲基伞形酮（4-MU）为探针反应,通过体外孵育实验,对其代谢产物4-甲基伞形酮-D-葡萄糖醛酸苷（4-MUG）进行定量分析。通过比较不同氯原子数量和羟基位置的OH-PCBs对UGT... 

【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校

【文章页数】：95 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
缩略语/符号说明
前言
    研究现状、成果
    研究目的、方法
试剂和方法
    1.1 标准品及配制溶剂
    1.2 化学试剂
        1.2.1 体外孵育体系中所含的化合物
        1.2.2 流动相
    1.3 配制溶液
        1.3.1 抑制剂
        1.3.2 Tris-HCl缓冲液
        1.3.3 二价金属溶液氯化镁溶液
        1.3.4 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸的反应起始溶液
        1.3.5 体外孵育终止反应液(含内标)
    1.4 仪器
    1.5 体外孵育体系
    1.6 UPLC的检测条件
酶抑制试验
    2.1 羟基多氯联苯对人重组UGT各亚型的初筛
    2.2 羟基多氯联苯对UGT各亚型的浓度依赖性及IC_(50)
        2.2.1 浓度依赖性
        2.2.2 IC_(50)
    2.3 抑制参数和抑制类型的判断
        2.3.1 方法
        2.3.2 抑制动力学类型
        2.3.3 Ki值
    2.4 体外体内外推法评估抑制能力
分子对接
    3.1 同源蛋白建模
    3.2 羟基多氯联苯与尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶的分子对接
统计学方法
结果
    5.1 各化合物的色谱峰及保留时间
    5.2 OH-PCBs对 UGT各亚型的抑制初筛
    5.3 OH-PCBs对 UGT各亚型的半数抑制浓度
    5.4 OH-PCBs对 UGT各亚型的抑制类型及Ki值
    5.5 基于抑制动力学参数Ki的体外体内外推
    5.6 分子对接验证
        5.6.1 活性位点分析
        5.6.2 氢键分析
        5.6.3 疏水作用分析
        5.6.4 结合自由能分析
讨论
    6.1 多氯联苯对尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶的抑制作用
    6.2 多氯联苯对磺基转移酶等Ⅱ相代谢酶的双重抑制作用
    6.3 科学研究对公共卫生与预防医学的贡献
结论
参考文献
发表论文和参加科研情况说明
综述 多氯联苯与细胞色素P450 酶系的代谢反应
    综述参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3201532