TGF-β1诱导肌成纤维细胞转化相关调节蛋白的蛋白组学筛选与验证

发布时间：2021-05-27 13:55

　　目的探讨双向凝胶电泳技术筛选及鉴定转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）诱导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的差异蛋白质。方法将大鼠原代肺成纤维细胞分为对照组及5 ng/ml TGF-β1诱导组（1、24h）,以双向凝胶电泳筛选差异蛋白,分离并进行质谱鉴定。以Western blot法、免疫荧光染色、免疫组织染色对5 ng/ml TGF-β1诱导（6～48 h）肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞过程中差异蛋白[Rho GDP解离抑制因子α（Rho GDIα）]进行验证并对矽肺纤维化相关指标[α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和I型前胶原（pro collagen-I）蛋白]进行检测。通过建立矽肺大鼠模型对肺组织中差异蛋白进行验证并对矽肺纤维化相关指标进行检测。结果经蛋白组学技术筛选出TGF-β1诱导的大鼠原代肺成纤维细胞的9个差异蛋白,与对照组相比,TGF-β1诱导组有8个蛋白点表达上调,1个蛋白点表达下调,其中Rho GDIα表达上调（P<0.05）。Western blot及免疫组化结果显示,与对照组相比,肺成纤维细胞Rho ... 

【文章来源】：环境与健康杂志. 2020,37(08)北大核心

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要仪器与试剂
    1.2 肺成纤维细胞培养
    1.3 TGF-β1诱导肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞过程中差异蛋白的筛选
        1.3.1 分组
        1.3.2 差异蛋白的2-DE
        1.3.3 差异蛋白的质谱分析
    1.4 TGF-β1诱导肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞过程中差异蛋白的验证及矽肺纤维化相关指标的检测
        1.4.1 分组
        1.4.2 I型前胶原（pro collagen-I）蛋白、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及Rho GDP解离抑制因子α（Rho GDIα）蛋白表达的Western blot检测
        1.4.3 TGF-β1诱导成纤维细胞的α-SMA和Rho GDIα共表达免疫荧光染色检测
    1.5 矽肺大鼠肺组织中差异蛋白的验证及矽肺纤维化相关指标的检测
        1.5.1 矽肺大鼠模型制备及实验分组
        1.5.2 大鼠肺组织中pro collagen-I蛋白、α-SMA及Rho GDIα蛋白表达的Western blot检测
        1.5.3 大鼠肺组织Rho GDIα表达的免疫组织化学染色
    1.6 统计学处理
2 结果
    2.1 TGF-β1诱导大鼠原代肺成纤维细胞关键差异蛋白的筛选
        2.1.1 2-DE图谱示意图
        2.1.2 差异蛋白点的判定
        2.1.3 差异蛋白鉴定结果
    2.2 TGF-β1诱导肺成纤维细胞后Rho GDIα、α-SMA和pro collagen-I蛋白表达的变化
    2.3 大鼠矽肺纤维化形成发展过程中肺组织内RhoGDIα、α-SMA和pro collagen-I蛋白表达的动态变化
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]尘肺生物样本库蛋白组学的应用展望[J]. 贺今,刘光峰,崔萍.  中国工业医学杂志. 2017(06)
[2]早期矽肺损伤的蛋白质组学研究及α晶状体球蛋白B的表达与验证[J]. 初令,王天生,胡永斌,蒋海鹰,谷永红,粟占三.  中南大学学报(医学版). 2015(08)
[3]贴壁细胞在载玻片爬片的新方法[J]. 徐洪,宋旭东,李莹,代健.  中国应用生理学杂志. 2009(02)



本文编号：3207696