硫丹诱导miR-22表达变化与HUVEC-C细胞损伤的关联研究

发布时间：2017-04-24 20:01

  本文关键词：硫丹诱导miR-22表达变化与HUVEC-C细胞损伤的关联研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：硫丹,是一种有机氯农药,被广泛应用于农业,并在2011年被斯德哥尔摩公约列入禁用的持久性有机污染物,具有持久性、高毒性和生物富集特征,与人类疾病尤其是心血管疾病的发生发展相关,对人类的健康构成了潜在的威胁。其生物毒性考虑与硫丹对细胞的直接损伤和对细胞功能的影响密不可分。已有研究显示硫丹具有多种细胞毒性,但其对内皮细胞的毒性研究尚未见报道。本研究着重探讨了不同剂量硫丹对人脐静脉内皮细胞(HUVEC-C)的毒性剂量效应关系；从分子水平和蛋白质水平分析了参与调控细胞周期阻滞和细胞凋亡的通路,炎症因子的变化及转录后调控因子miR-22的作用机制。结果表明,硫丹能够引起血管内皮细胞毒性,表现为细胞存活率降低,从20μM开始出现极显著的细胞增殖抑制作用(P0.01),并具有剂量依赖性。硫丹在高剂量下(60μM)通过CDK6/pRb通路诱导细胞周期阻滞在G1期,在较高剂量下(40μM和60μM)通过线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡,并且促发炎症因子IL-6的分泌及上调IL-6,IL-8的基因表达,提示硫丹暴露能够造成血管内皮细胞功能失调。此外,硫丹特异性地诱导miR-22的表达上调,具有时间和剂量依赖性关系。通过转染实验证实miR-22过表达导致细胞凋亡并使得炎症因子IL-8的相对mRNA表达水平升高,但与细胞周期的阻滞无关,提示miR-22可能参与调控硫丹诱导的HUVEC-C细胞的凋亡和炎症反应过程。本研究明确了硫丹具有内皮细胞毒性,能够导致内皮细胞功能失调,阐明了硫丹引起人内皮细胞功能失调的分子机制。通过对miR-22表达变化和miR-22的内皮细胞功能研究,揭示了miR-22变化与硫丹所诱导的内皮细胞损伤的关联,这为将来研究硫丹暴露引起人类疾病尤其是心血管疾病的诊断和预防提供了科学依据。
【关键词】：硫丹 HUVEC-C细胞 内皮细胞损伤 miR-22 心血管疾病
【学位授予单位】：大连海事大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要5-6
• ABSTRACT6-10
• 第1章 绪论10-21
• 1.1 硫丹的研究背景10-15
• 1.1.1 硫丹的结构和理化性质10-11
• 1.1.2 硫丹的毒理学特点11
• 1.1.3 硫丹对人类健康的危害11-13
• 1.1.4 硫丹的细胞毒性研究现状13-15
• 1.2 血管内皮细胞的研究意义15-17
• 1.2.1 血管内皮细胞的特点15-16
• 1.2.2 血管内皮损伤与功能失调16-17
• 1.2.3 血管内皮损伤与人类疾病关联17
• 1.3 miRNA的研究进展17-20
• 1.3.1 miRNA简介17-18
• 1.3.2 miRNA在心血管疾病中的作用18-19
• 1.3.3 miR-22的研究进展19-20
• 1.4 本研究的目的及意义20-21
• 第2章 材料与方法21-39
• 2.1 实验材料21
• 2.2 实验设备及试剂21-25
• 2.2.1 实验设备21-22
• 2.2.2 实验耗材及试剂22-25
• 2.3 实验方法25-39
• 2.3.1 细胞培养25
• 2.3.2 细胞复苏25-26
• 2.3.3 细胞冻存26
• 2.3.4 细胞传代26-27
• 2.3.5 细胞同步化处理27
• 2.3.6 硫丹暴露处理27
• 2.3.7 细胞毒性测定27-28
• 2.3.8 细胞增殖测定28
• 2.3.9 细胞周期检测28-29
• 2.3.10 蛋白质免疫印迹实验29-31
• 2.3.11 细胞凋亡检测31-32
• 2.3.12 分光光度法检测caspase-3相对活化程度32
• 2.3.13 线粒体膜电位检测32-33
• 2.3.14 转染实验33-34
• 2.3.15 miRNA的实时荧光定量PCR检测34-36
• 2.3.16 mRNA的实时荧光定量PCR检测36-38
• 2.3.17 酶联免疫吸附实验38
• 2.3.18 统计学分析方法38-39
• 第3章 结果与讨论39-59
• 3.1 硫丹暴露对HUVEC-C细胞功能的影响39-52
• 3.1.1 硫丹暴露对HUVEC-C细胞毒性的影响39-40
• 3.1.2 硫丹暴露对HUVEC-C细胞周期的影响及其分子机制研究40-44
• 3.1.3 硫丹暴露对HUVEC-C细胞凋亡的影响及其分子机制研究44-49
• 3.1.4 硫丹暴露对HUVEC-C细胞炎症因子IL-6和IL-8分泌及表达的影响49-52
• 3.2 miR-22表达变化及功能研究52-59
• 3.2.1 硫丹暴露对miR-22表达的时间效应和剂量效应影响52-54
• 3.2.2 miR-22在血管内皮细胞中的功能研究54-59
• 结论59-60
• 参考文献60-69
• 攻读学位期间公开发表论文69-70
• 致谢70-71
• 作者简介71

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