四氯苯醌激活Caspase 8/t-Bid诱导PC12细胞凋亡的信号通路分析

发布时间：2021-06-25 08:17

　　四氯苯醌（TCBQ）过去常被用作防腐剂和农药产品,它可通过食物链进入生物体而损害机体健康。本课题组之前报道指出TCBQ能诱导HepG2细胞产生活性氧和细胞遗传毒性,但其是否具有神经毒性尚未有研究,所以明确其毒性及机制为寻找新的减毒措施,指导临床合理用药具有重要意义。醌类结构的物质在体内的氧化还原过程会产生大量的活性氧（ROS）,进而发生氧化应激反应,引起酶、氨基酸、蛋白质的氧化破坏,从而引起机体疾病如衰老、肿瘤、突变及炎症等。ROS影响着细胞的生化过程,是诱导细胞凋亡的一个重要因子。细胞凋亡是一种主动的过程,是细胞对环境的生理性病理性刺激信号,环境条件的变化或缓和性损伤产生的应答有序变化的死亡过程。其与多细胞生物的发育、分化、稳态维持及某些疾病发生等多种生命活动都密切相关。细胞凋亡主要包括三条信号转导通路：死亡受体途径、线粒体依赖途径和内质网途径。大鼠肾上腺嗜铬骨髓瘤细胞（PC12细胞）被广泛用于神经生物学和神经毒理学的研究,因此本文选用PC12细胞作为研究对象。首先采用AO/EB染色鉴别凋亡坏死,DAPI, Hoechst染色鉴别不同浓度的TCBQ对于细胞形态的影响。用JC-1荧光探... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩写符号对照表
第一章 绪论
    1.1 引言
    1.2 四氯苯醌
        1.2.1 四氯苯醌的性质
        1.2.2 四氯苯醌的应用
    1.3 活性氧简介
    1.4 细胞凋亡
        1.4.1 受体依赖的细胞凋亡的信号传导通路(外部通路)
        1.4.2 线粒体依赖的细胞凋亡的信号传导通路(内部通路)
        1.4.3 内质网凋亡通路
    1.5 Caspase 8/t-Bid通路
        1.5.1 Caspase 8
        1.5.2 Bid
    1.6 立题依据和意义
第二章 四氯苯醌激活Caspase 8/t-Bid诱导PC12细胞凋亡
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 主要试剂
        2.2.2 主要仪器和设备
        2.2.3 主要溶剂
    2.3 实验方法
        2.3.1 细胞培养、冻存和复苏
        2.3.2 细胞存活率
        2.3.3 乳酸脱氢酶活性的检测
        2.3.4 细胞形态观察
        2.3.5 线粒体膜电位(MMP)检测
        2.3.6 Annexin V-FITC/PI方法检测细胞凋亡
        2.3.7 免疫荧光双染实验
        2.3.8 细胞蛋白提取
        2.3.9 Western blot实验
        2.3.10 数据统计
    2.4 实验结果
        2.4.1 TCBQ对于PC12细胞存活率的影响
        2.4.2 TCBQ对PC12细胞乳酸脱氢酶的影响
        2.4.3 TCBQ诱导PC12细胞凋亡
        2.4.4 TCBQ通过激活线粒体通路诱导细胞凋亡
        2.4.5 TCBQ通过激活死亡受体通路诱导细胞凋亡
        2.4.6 TCBQ通过t-Bid表达而激活内外凋亡通路
        2.4.7 Caspase 8抑制剂对TCBQ诱导凋亡的影响
    2.5 讨论
第三章 ROS在caspase 8/t-Bid通路中的作用及机制研究
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 溶剂与试剂
        3.2.2 主要仪器和设备
    3.3 实验方法
        3.3.1 ROS的检测
        3.3.2 GSH含量的测定
        3.3.3 MDA含量的测定
        3.3.4 蛋白质羰基含量的测定
        3.3.5 抗氧化剂NAC对死亡受体通路的影响
    3.4 实验结果
        3.4.1 TCBQ诱导ROS的产生
        3.4.2 TCBQ对细胞中GSH含量的影响
        3.4.3 TCBQ对细胞中MDA含量的影响
        3.4.4 TCBQ对细胞中蛋白质羰基含量的影响
        3.4.5 抗氧化剂NAC抑制死亡受体通路的激活
    3.5 讨论
参考文献
致谢
作者攻读硕士学位期间已发表的科研成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]蛋白质羰基化与衰老[J]. 李国林,印大中.  中国老年学杂志. 2008(20)
[2]三丁基锡（TBT）对罗非鱼两组织SOD和GSH的影响[J]. 马晓燕,范立民,甘居利,胡庚东,瞿建宏,陈家长.  安全与环境学报. 2007(04)
[3]细胞凋亡信号转导途径及调控的研究进展[J]. 王德成,高洪.  动物医学进展. 2003(06)
[4]四氯苯醌的综合利用[J]. 陈光雨.  染料工业. 1982(06)



本文编号：3248856