硫酸镍对体外培养的大鼠睾丸间质细胞睾酮合成酶和氧化应激的影响

发布时间：2017-04-28 15:13

  本文关键词：硫酸镍对体外培养的大鼠睾丸间质细胞睾酮合成酶和氧化应激的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的观察硫酸镍(NiSO4)致体外培养的大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的变化,从睾酮合成酶和氧化应激角度探讨其可能机制。 方法采用胶原酶消化、Percoll梯度密度离心和差速贴壁法体外分离和纯化大鼠睾丸间质细胞,并用3p-HSD染色法对细胞纯度进行鉴定。体外培养的睾丸间质细胞分别用0、250、500和1000μmol/L NiSO4及1IU/m1人绒毛膜促性腺激素(hCG)处理6、12和24h。用酶联免疫吸附法检测培养上清液中睾酮(T)浓度。实时荧光定量PCR技术检测睾丸间质细胞类固醇合成快速调节蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)和类固醇17α-羟化酶(P450c17) mRNA的表达水平。流式细胞仪检测睾丸间质细胞内活性氧(ROS)水平,分光光度法检测细胞抑制羟自由基能力(Anti-OH),酶联免疫吸附法检测细胞内8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的含量。 结果(1)3β-HSD法鉴定结果显示,体外纯化的大鼠睾丸间质细胞胞浆呈深蓝色,其纯度可达90%以上。(2)睾酮测定结果显示：相同处理浓度,与0h组比较,hCG和NiSO4Oμmol/L同时处理睾丸间质细胞24h后培养上清液中T浓度明显升高(P0.01),hCG和NiSO41000μmol/L同时处理间质细胞24h后培养上清液中T浓度明显降低(P0.01)。相同处理时间,与对照组比较,hCG和NiSO4各浓度同时处理间质细胞24h后,NiSO4各浓度组培养上清液中T浓度明显降低(P0.01)。(3)实时荧光定量PCR检测结果显示：hCG和NiSO4同时处理睾丸间质细胞24h后,与0h组比较,NiSO40μmol/L处理组间质细胞StAR mRNA表达量明显升高(P0.01), NiSO4250μmol/L处理组间质细胞P450scc、3p-HSD和P450c17mRNA表达量均明显降低(P0.01),而NiSO4500μmol/L和1000μmol/L处理组间质细胞StAR、P450scc、3β-HSD和P450c17mRNA表达量均明显降低(P0.01)。hCG和NiSO4同时处理睾丸间质细胞24h后,与对照组比较,NiSO4各浓度组StAR、P450scc、3β-HSD和P450c17mRNA表达量均明显降低(P0.01)。(4)细胞内ROS含量测定结果显示：相同处理浓度,与0h组比较,NiSO4250μmol/L组处理12h后大鼠睾丸间质细胞ROS水平增高(P 0.05); NiSO4500和1000μmol/L处理睾丸间质细胞6、12和24h后,间质细胞内ROS水平均明显增高(P0.05)。相同处理时间,与对照组比较,硫酸镍处理6h后,NiSO4500和1000μmol/L处理组细胞内ROS水平明显增加(P0.05)；硫酸镍处理12h后,NiSO4500和1000μmol/L处理组细胞内ROS水平明显增高(P0.05)；硫酸镍处理24h后,NiSO4各浓度组均使细胞内ROS水平明显增高(P0.01)。(5)间质细胞Anti-OH水平测定结果显示：相同处理浓度,与0h组比较,NiSO4250μmol/L处理12h和24h后间质细胞Anti-·OH水平降低(P0.01); NiSO4500和1000μmol/L分别处理6、12和24h后间质细胞Anti-OH水平均降低(P0.05)。相同处理时间,与对照组比较,硫酸镍处理6h后,NiSO4500和1000μmol/L组间质细胞Anti-'OH水平降低(P0.05)；硫酸镍处理12h和24h后,NiSO4各浓度组间质细胞Anti-·OH水平均降低(P0.01)。(6)8-OHdG测定结果显示：相同处理浓度,与0h组比较,NiSO4500和1000μmol/L分别处理12和24h后细胞内8-OHdG含量均增加(P0.01)。相同处理时间,与对照组比较,硫酸镍处理12和24h后,NiSO4500和1000μmol/L组细胞内8-OHdG含量均显著增加(P0.05)。 结论硫酸镍诱导的体外培养大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌量降低可能与其引起的间质细胞睾酮合成酶基因表达下调及DNA氧化损伤有关。
【关键词】：硫酸镍 睾丸间质细胞 睾酮 睾酮合成酶 氧化应激
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-9
• 第一章 前言9-18
• 1 镍的一般毒作用概述9-13
• 1.1 人体镍暴露途径9
• 1.2 镍在细胞内分布9-10
• 1.3 镍的生物学作用10
• 1.4 镍的一般毒作用10-11
• 1.5 镍的毒作用机制11-13
• 2 镍的雄性生殖毒性13-16
• 2.1 镍对雄性生殖内分泌的影响13-14
• 2.2 镍对睾丸的影响14
• 2.3 镍对精子的影响14-15
• 2.4 镍对睾丸间质细胞的影响15-16
• 3 自由基及DNA氧化损伤16-17
• 4 研究目的及意义17-18
• 第二章 硫酸镍对体外培养大鼠睾丸间质细胞睾酮合成的影响18-30
• 1 材料与方法18-21
• 1.1 材料18-19
• 1.2 方法19-21
• 1.3 统计学处理21
• 2 结果21-26
• 2.1 大鼠睾丸间质细胞的差速贴壁培养纯化及鉴定21-23
• 2.2 大鼠睾丸间质细胞的形态学特征23
• 2.3 硫酸镍对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌的影响23-24
• 2.4 硫酸镍对体外培养大鼠睾丸间质细胞睾酮合成酶基因表达的影响24-26
• 3 讨论26-30
• 第三章 硫酸镍对体外培养大鼠睾丸间质细胞氧化应激的影响30-37
• 1 材料与方法30-31
• 1.1 材料30
• 1.2 方法30-31
• 1.3 统计学处理31
• 2 结果31-33
• 2.1 硫酸镍对大鼠睾丸间质细胞ROS水平的影响31-32
• 2.2 硫酸镍对大鼠睾丸间质细胞Anti-HO的影响32
• 2.3 硫酸镍对大鼠睾丸间质细胞8-OHdG含量的影响32-33
• 3 讨论33-37
• 参考文献37-43
• 在学期间研究成果43-44
• 附录44-45
• 致谢45

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 郑菁;张志刚;孙应彪;苏莉;夏胡;李成云;张瑞;李晋;;硫酸镍对体外培养大鼠睾丸间质细胞超微结构的影响[J];工业卫生与职业病;2012年01期

2 LIU Qing;GU Jian Hong;YUAN Yan;LIU Xue Zhong;WANG Ya Jun;WANG Han Dong;LIU Zong Ping;WANG Zong Yuan;BIAN Jian Chun;;Effect of Cadmium on Rat Leydig Cell Testosterone Production and DNA Integrity in vitro[J];Biomedical and Environmental Sciences;2013年09期

3 关聪会;张志刚;孙应彪;孔德万;李成云;赵秋燕;;硫酸镍对体外培养大鼠睾丸间质细胞毒作用的实验研究[J];毒理学杂志;2011年04期

4 张志刚;孙应彪;关聪会;李成云;张瑞;孔德万;赵秋燕;;硫酸镍诱导体外大鼠睾丸间质细胞凋亡及其对c-kit和caspase-3基因表达的影响[J];毒理学杂志;2011年05期

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本文编号：333063