microRNA在氯乙烯致大鼠DNA损伤和细胞周期改变中的作用

发布时间：2017-04-28 11:35

  本文关键词：microRNA在氯乙烯致大鼠DNA损伤和细胞周期改变中的作用，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:通过检测亚慢性染毒氯乙烯(VCM)对大鼠肝脏细胞细胞周期时相分布的影响和大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤情况,探讨氯乙烯致癌过程中G1/S期监测点功能变化以及致DNA损伤的剂量-反应关系;检测相关大鼠肝脏mi RNAs表达水平改变,探讨mi RNAs在VCM致细胞周期改变中的作用,从分子水平探讨氯乙烯致肝脏肿瘤的发病机制。方法:选用96只健康雄性SD大鼠,按体重随机分成4组,每组24只,分别为对照组、VCM低剂量(5mg/kg)、中剂量(25mg/kg)和高剂量(125mg/kg)三个剂量组。采用腹腔注射染毒,隔日染毒,每周3次。在染毒6、8、12周后分别随机处死8只大鼠。1.VCM致肝细胞遗传毒性的研究:应用彗星实验研究外周血淋巴细胞DNA损伤水平;应用流式细胞技术研究肝细胞细胞周期的改变。2.肝细胞mi R-199a-3p、mi R-221、mi R-222的表达水平:处死大鼠取其肝脏,提取total RNA并进行逆转录反应,应用实时荧光定量PCR检测肝脏组织中上述mi RNA的表达量,采用2-△△Ct法进行数据分析。结果:1.大鼠一般情况、体重变化及肝体比大鼠在染毒期间一般情况和进食均未见异常,各个组均未出现明显中毒症状。各组动物体重均呈正常的增长趋势,且差异无统计学意义(P0.05)。8周和12周染毒结束时,各染毒组大鼠的肝体比均低于对照组,但差异无统计学意义(P0.05)。2.彗星实验研究外周血淋巴细胞DNA损伤水平VCM染毒8周后,高剂量组(125mg/kg)淋巴细胞尾部DNA含量百分比明显高于对照组,且差异有统计学意义(P0.01)。VCM染毒12周后,与对照组相比,Olive尾距和尾长各剂量组都明显增高(P0.05);中剂量组(25 mg/kg)尾部DNA含量百分比低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。3.流式细胞术检测大鼠肝脏细胞周期分布变化VCM染毒6周后,各染毒组大鼠肝细胞G1期百分比随剂量的增加而呈上升趋势,其中高剂量组(125mg/kg)的G1期分布百分比明显高于对照组,且差异有统计学意义(P0.05)。VCM染毒8周后,低剂量组(5mg/kg)G1期分布百分比低于对照组,差异有统计学意义(P0.05);低剂量组S期分布百分比高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。VCM染毒12周后,S期分布百分比随剂量的升高而呈上升趋势,高剂量组(125mg/kg)S期分布百分比明显高于对照组,且差异有统计学意义(P0.05)。4.实时荧光定量PCR检测大鼠肝细胞mi R-199a-3p、mi R-221、mi R-222的表达情况VCM染毒6周后,大鼠肝脏组织mi RNA-221和mi RNA-222相对表达水平都随着VCM染毒剂量的增加而呈下降的趋势,高剂量组mi RNA-221和mi RNA-222相对表达量均明显低于对照组(P0.05);与对照组相比,中剂量和高剂量mi RNA-199a-3p相对表达量均降低(P0.05)。VCM染毒8周后,低剂量组mi RNA-221和mi RNA-222相对表达量均高于对照组,但差异无统计学意义(P0.05);各个剂量组mi RNA-199a-3p相对表达量随着VCM染毒剂量的增加而呈现上升的趋势,但差异无统计学意义(P0.05)。VCM染毒12周后,大鼠肝脏mi RNA-221相对表达量随着VCM染毒剂量的增加而呈上升的趋势,低剂量组mi RNA-221相对表达量低于对照相(P0.05);mi RNA-222相对表达量随着VCM染毒剂量的增加而呈上升的趋势,但与对照组相比,差异无统计学意义(P0.05);mi RNA-199a-3p相对表达量随着VCM染毒剂量的增加而呈上升的趋势,低剂量组和中剂量组的mi RNA-199a-3p相对表达量均低于对照组(P0.05)。5.大鼠肝脏细胞周期与mi R-199a-3p、mi R-221、mi R-222表达水平的相关分析VCM染毒6周后,大鼠肝脏细胞mi RNA-221、mi RNA-222和mi RNA-199a-3p的表达水平与G1期分布百分比呈负相关,相关系数r分别为0.6、0.44、0.51,且具有统计学意义(P0.05)。VCM染毒8周后,大鼠肝脏细胞mi RNA-221、mi RNA-222和mi RNA-199a-3p的表达水平与G1期和S期分布百分比均未呈现相关关系(P0.05)。VCM染毒12周后,大鼠肝脏细胞mi RNA-221、mi RNA-222和mi RNA-199a-3p的表达水平与G1期分布百分比未呈现相关关系(P0.05)。大鼠肝脏细胞mi RNA-221的表达水平与S期分布百分比呈现相关关系,相关系数为0.41,且有统计学意义(P0.05);mi RNA-222和mi RNA-199a-3p的表达水平与S期分布百分比未呈现相关关系(P0.05)。结论:1.在本实验条件下,VCM染毒可导致大鼠外周血淋巴细胞DNA损伤。2.VCM染毒可能影响大鼠肝脏细胞G1/S关卡功能,早期发生G1期阻滞现象,中、后期发生G1期阻滞现象消失,并出现S期阻滞现象。3.mi RNA-221、mi RNA-222和mi RNA-199a-3p的低表达与VCM染毒前期致大鼠肝细胞周期G1阻滞有关;而后期mi RNA-221表达上调可能与VCM致大鼠肝脏细胞后期G1期阻滞消失而S期阻滞出现有关。
【关键词】：氯乙烯 DNA损伤 细胞周期 G1/S关卡 microRNA表达
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 前言13-15
• 第一部分 氯乙烯对大鼠DNA损伤情况及肝脏细胞周期的影响15-30
• 1 材料与方法15-20
• 1.1 主要仪器设备及试剂15-16
• 1.2 试剂配备16-17
• 1.3 动物选择及饲养17
• 1.4 动物分组及染毒17
• 1.5 动物标本采集17
• 1.6 彗星试验17-18
• 1.7 流式细胞仪检测细胞周期18-19
• 1.8 统计分析19-20
• 2 结果20-27
• 2.1 大鼠的一般情况及体重变化20-21
• 2.2 VCM对大鼠外周淋巴血DNA损伤情况21-23
• 2.3 大鼠的细胞周期分布变化23-27
• 3 讨论27-29
• 4 结论29-30
• 第二部分 氯乙烯对大鼠肝细胞microRNA表达的影响30-46
• 1 材料与方法30-36
• 1.1 主要仪器和试剂30-31
• 1.2 主要试剂的配备31-32
• 1.3 荧光定量PCR实验32-35
• 1.4 统计分析35-36
• 2 结果36-42
• 2.1 RNA质量检测结果36
• 2.2 大鼠肝细胞G1/S关卡相关miRNA荧光定量PCR扩增曲线和溶解曲线36-37
• 2.3 肝脏细胞周期G1/S关卡相关基因miRNA的表达情况及相关系数37-42
• 3 讨论42-45
• 4 结论45-46
• 参考文献46-49
• 综述49-55
• 参考文献53-55
• 致谢55-56
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果56-57
• 个人简介57

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 刘琴;付汉江;郑晓飞;;microRNA与细胞周期调控[J];军事医学科学院院刊;2008年05期

2 曹亚;细胞周期与肿瘤[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2002年02期

3 ;Impact of tiny miRNAs on cancers[J];World Journal of Gastroenterology;2007年04期

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本文编号：332747