四种类型化学致敏物对细胞因子表达的影响

发布时间：2017-04-28 06:00

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【摘要】：目的探讨不同类型化学致敏物作用于THP-1源性巨噬细胞后产生的多种细胞因子，，从而建立致敏反应的细胞因子谱；以特异性细胞因子表达改变为检测指标，进行动物实验的研究验证，寻找最灵敏的标记物来检测化学物对皮肤的潜在致敏性，为皮肤致敏体外方法的建立及其科学性和有效性验证提供实验数据和参考依据。 方法1将人单核细胞株THP-1细胞用佛波酯（PMA，0.1μg/ml）诱导72小时，使之转化为具有贴壁能力的THP-1巨噬细胞。选择4种不同类型的化学致敏物硫酸镍（NiSO4）、重铬酸钾（K2Cr2O7）、2,4-二硝基氯代苯（DNCB）、苯二胺（PPDA）、异氰酸酯（TDI）和2种非化学致敏物十二烷基磺酸钠（SDS）、异丙醇（IPA）作用转化的THP-1不同时间后，应用ELISA法检测细胞培养上清中IL-6、TNF-α的表达水平，流式液相多重蛋白定量技术（CBA）检测细胞培养上清中细胞因子IL-1β、IL-8、IL-4、IL-10、INF-γ的表达水平。2BALB/C小鼠30只，随机分为3组，即对照组、0.5%NiSO4和2%NiSO4组。其中NiSO4组的小鼠应用闭塞补丁的染毒方式染毒3天，而对照组小鼠染毒相同剂量的DMSO。流式液相多重蛋白定量技术（CBA）分别检测血清和脾细胞培养上清中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平，用EDU方法检测T细胞增殖情况。 结果1NiSO4、DNCB、K2Cr2O7作用THP-1细胞6h，PPDA和TDI作12h时，细胞上清中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-8的表达量最高。2化学致敏物NiSO4、DNCB、K2Cr2O7、PPDA、TDI在最适时间点最适浓度刺激细胞分泌IL-6的水平分别为对照组的40、25、20、50、50倍，TNF-α水平为对照组的20、12、20、8、5倍，IL-1β水平为对照组的30、60、25、30、45倍，IL-8水平为对照组的15、12、15、12、7倍。3非致敏物SDS与IPA处理组IL-6水平均有升高，其中SDS组升高最明显，约为空白对照组的20倍，TNF-α、IL-1β、IL-8表达水平无明显变化。4IL-4、IL-10、INF-γ等3种细胞因子未检测出变化。5小鼠染毒NiSO43天后，结果显示：0.5%NiSO4染毒组和2%NiSO4染毒组小鼠血清中TNF-α水平分别为7.88pg/ml，18.66pg/ml，高于对照组的2.98pg/ml，差异有统计学意义（P0.05）；同时0.5%NiSO4染毒组和2%NiSO4染毒组小鼠血清中IL-6水平分别为10.94pg/ml，22.55pg/ml，高于对照组的4.79pg/ml，差异有统计学意义（P0.05）；而染毒组与对照组小鼠血清中IL-1β水平无显著差异。NiSO4染毒组脾细胞培养上清中IL-6、TNF-α、IL-1β水平均显著高于未染毒组（P0.05），且随着染毒剂量的升高，细胞上清中IL-6和TNF-α、IL-1β表达量也逐渐增加。6小鼠连续体内染毒3天后，体内EDU检测结果发现：2%NiSO4染毒组T细胞增殖量明显高于对照组，两组间存在显著性差异（P0.05）。0.5%NiSO4染毒组T细胞增殖量与对照组相比增高不明显。 结论四种类型化学致敏物均能够引起TNF-α、IL-1β、IL-8等细胞因子的表达量升高，动物实验的验证金属类致敏物引起的细胞因子的变化与细胞实验相一致，提示金属类致敏物可应用THP-1巨噬细胞为模型，并选择6h作为细胞因子分泌的最佳时间点分泌的TNF-α、IL-1β、IL-8来检测其致敏性。
【关键词】：化学致敏物 THP-1细胞 细胞因子 细胞增殖 ELISA 流式液相多重 蛋白定量技术
【学位授予单位】：河北联合大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略词10-11
• 引言11-13
• 第1章 四种类型化学致敏物对细胞因子表达的影响13-49
• 1.1 材料与方法14-28
• 1.1.1 仪器与试剂14-17
• 1.1.2 实验方法17-28
• 1.2 结果28-38
• 1.2.1 THP-1 悬浮细胞转化成为贴壁的巨噬细胞28-29
• 1.2.2 五种化学物刺激 THP-1 细胞后，细胞相对存活率29-30
• 1.2.3 四种不同类型的化学致敏物作用于转化的 THP-1 细胞不同时间后，其上清中细胞因子表达水平的变化30-33
• 1.2.4 不同浓度致敏物作用转化的 THP-1 细胞后，各组细胞上清中细胞因子表达水平的变化33-34
• 1.2.5 NiSO_4染毒对实验小鼠脾细胞增殖的影响34-37
• 1.2.6 NiSO_4染毒对实验小鼠血清中细胞因子表达的变化37-38
• 1.2.7 小鼠脾细胞上清中细胞因子表达水平38
• 1.3 讨论38-43
• 1.3.1 化学致敏物作用于 THP-1 巨噬细胞对细胞因子表达的影响39-41
• 1.3.2 化学致敏物作用 THP-1 巨噬细胞不同时间后对细胞因子的影响41
• 1.3.3 NiSO_4染毒后对小鼠血清和脾细胞上清中细胞因子的影响41-42
• 1.3.4 NiSO_4染毒后对小鼠脾细胞增殖情况的影响42-43
• 1.4 结论43
• 参考文献43-49
• 第2章 综述 镍毒性及生物标志物研究进展49-56
• 2.1 镍的理化性质及检测方法49-50
• 2.2 镍的主要健康危害效应50-53
• 2.2.1 致敏性50-51
• 2.2.2 心血管毒性51-52
• 2.2.3 致癌性52
• 2.2.4 生殖毒性和肝脏毒性52-53
• 参考文献53-56
• 致谢56-57
• 导师简介57-58
• 作者简介58-59
• 学位论文数据集59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王敏,吴中亮,陈家X;镍化合物诱发恶性转化细胞的端粒酶活性表达[J];癌变.畸变.突变;2003年04期

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本文编号：332210