金黄色葡萄球菌可视化检测方法的建立与评价

发布时间：2021-08-28 00:17

　　研究目的:金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性致病菌,其本身杀伤性不大,但在食品中大量繁殖之后可产生金黄色葡萄球菌肠毒素。金黄色葡萄球菌肠毒素对肠道破坏性大,常引起金黄色葡萄球菌肠炎,该病起病急,中毒症状严重,临床症状主要表现为呕吐、发热、腹痛、腹泻和休克等,严重可导致循环衰竭。目前,针对金黄色葡萄菌的实验室检测方法,主要有传统分离培养生化鉴定法、免疫学检测方法和分子生物学检测方法。但这些方法存在着操作复杂、耗时长、灵敏性低、特异性差、对实验条件和操作人员要求较高等缺点。因此,建立一种操作简单、快速、灵敏且准确的金黄色葡萄球菌的检测方法对预防和控制由金黄色葡萄球菌引发的食品安全问题十分必要。本课题旨在通过卵黄抗体技术、免疫磁分离技术、TMB（3,3’,5,5’-四甲基联苯胺）-HRP（辣根过氧化物酶）-H₂O₂（过氧化氢）显色体系,建立一种金黄色葡萄球菌快速可视化检测方法,并对所建立的检测方法进行评价,为食品安全监督防控提供一定的技术支撑。研究方法:1.金黄色葡萄球菌鸡卵黄抗体的制备与鉴定以金黄色葡萄球菌灭活菌液作为抗原,与弗氏完全佐剂/弗氏不完... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
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第1章 绪论
    1.1 金黄色葡萄球菌概述
        1.1.1 金黄色葡萄球菌微生物学特性
        1.1.2 金黄色葡萄球菌流行病学特性
        1.1.3 金黄色葡萄球菌的致病性及致病机理
    1.2 金黄色葡萄球菌检测方法现状
        1.2.1 传统培养法
        1.2.2 免疫学方法
        1.2.3 分子生物学方法
    1.3 免疫磁分离技术
    1.4 卵黄抗体技术
    1.5 本实验的研究目的、意义和创新点
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 相关试剂与耗材
        2.1.2 相关试剂的配制
        2.1.3 实验仪器
        2.1.4 实验菌株
    2.2 实验方法
        2.2.1 金黄色葡萄球菌鸡卵黄抗体的制备与鉴定
        2.2.2 免疫磁珠的制备与表征
        2.2.3 金黄色葡萄球菌可视化检测方法的建立
        2.2.4 金黄色葡萄球菌可视化检测方法效果评价
第3章 实验结果
    3.1 金黄色葡萄球菌鸡卵黄抗体的制备与鉴定
        3.1.1 鸡卵黄抗体效价的测定
        3.1.2 鸡卵黄抗体纯度的鉴定
        3.1.3 鸡卵黄抗体蛋白含量的鉴定
        3.1.4 鸡卵黄抗体特异性的评价
    3.2 功能化羧基磁珠和免疫磁珠的表征
        3.2.1 透射电子显微镜表征结果
        3.2.2 红外光谱表征结果
        3.2.3 磁力表征结果
    3.3 金黄色葡萄球菌可视化检测方法的建立
        3.3.1 免疫磁珠用量和富集时间的优化
        3.3.2 H_2O_2 用量的优化
        3.3.3 H_2O_2 分解反应时间的优化
        3.3.4 显色液pH值的优化
        3.3.5 TMB溶液浓度的优化
        3.3.6 HRP溶液浓度的优化
    3.4 金黄色葡萄球菌可视化检测方法的评价
        3.4.1 检测限的确定
        3.4.2 准确度的确定
        3.4.3 特异性的评价
        3.4.4 重复性的评价
        3.4.5 模拟样的检测以及加标回收率的测定
第4章 讨论
    4.1 鸡卵黄抗体的制备与鉴定
    4.2 免疫磁珠的制备和表征
    4.3 TMB-HRP-H_2O_2 显色体系
    4.4 检测体系反应条件的优化
    4.5 模拟样品的检测
第5章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的研究成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]金黄色葡萄球菌壁磷壁酸结构、功能及其糖基化修饰概述[J]. 熊梦园,李一荣.  武汉大学学报(医学版). 2020(03)
[2]一起由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒病原溯源[J]. 李晓路,遇婷,廖文,张巍,何颖,祝琳.  中国药物经济学. 2019(12)
[3]一起由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒检测分析[J]. 黄彬红,蔡津霖,庄一鸣.  按摩与康复医学. 2019(22)
[4]联合环介导等温扩增技术和横向流动试纸条检测金黄色葡萄球菌[J]. 陈欢,余蓓蓓,黄世旺,徐昌平,毛争争.  预防医学. 2019(04)
[5]2015年中国大陆食源性疾病暴发事件监测资料分析[J]. 付萍,王连森,陈江,白光大,徐粒子,王帅,郭云昌.  中国食品卫生杂志. 2019(01)
[6]一起由金黄色葡萄球菌及其肠毒素引发食物中毒的实验室检测与分析[J]. 栾阳,张晔,张金,黄河清,王增国.  医学动物防制. 2018(11)
[7]环介导等温扩增微流控检测方法研究进展[J]. 殷宏,汤小玉,薛强,邹明强.  检验检疫学刊. 2018(03)
[8]食品安全中食源性致病菌现代检测技术的研究进展[J]. 张鹏辉,郭梦冉,耿凤珍,檀建新.  黑龙江畜牧兽医. 2017(09)
[9]金黄色葡萄球菌菌膜形成过程中过氧化氢酶变化的研究[J]. 杨存迪,李忠海,任佳丽.  食品与机械. 2017(04)
[10]副溶血性弧菌高免卵黄抗体的制备和不同提纯方法效果的比较[J]. 翟玥,曲笑锋,庞博,李丽,徐坤,王梦涵,高孜博,宋佳音,宋秀玲,金明华.  吉林大学学报(医学版). 2017(02)

博士论文
[1]三种人兽共患病病原菌同步快速检测技术研究[D]. 李丽.吉林大学 2017

硕士论文
[1]食品中布鲁氏菌快速检测方法的建立及效果评价[D]. 宋丹丹.吉林大学 2017
[2]金黄色葡萄球菌生物被膜相关基因型及其分子进化规律的研究[D]. 刘晓晨.华南理工大学 2015



本文编号：3367394