氧化应激和内质网应激在镉抑制小鼠睾丸间质细胞睾酮合成中的作用

发布时间：2021-09-03 22:48

　　镉是一种有毒的重金属元素,对人类健康具有严重的损害作用。镉暴露与人类精子质量下降及男性不育有关。镉能引起睾丸生殖细胞凋亡、干扰睾酮合成与分泌可能是镉雄性生殖毒性的主要原因。课题组前期体内外研究均发现,镉能抑制小鼠睾丸间质细胞睾酮的合成和分泌,然而目前对镉抑制其睾酮合成和分泌的分子机制尚不清楚。本课题主要以小鼠睾丸间质细胞TM3细胞为研究对象,探讨氧化应激和内质网应激在镉抑制TM3细胞睾酮合成中的分子机制。目的分别采用抗氧化剂NAC和小分子化学伴侣4-PBA抑制镉诱导TM3细胞发生的氧化应激和内质网应激,研究氧化应激和内质网应激在镉抑制TM3细胞睾酮合成中的作用。方法（1）为阐明氧化应激对镉抑制TM3细胞睾酮合成的影响,将TM3细胞分为阴性对照组、NAC组、CdCl₂组、NAC+CdCl₂组四种处理方式。提取各处理组上清液,用ELISA法测定各组睾酮的水平;提取各组细胞的mRNA和蛋白,RT-PCR法和western blot法检测睾酮合成关键酶的表达情况及氧化应激指标的变化。（2）为阐明内质网应激对镉抑制TM3细胞睾酮合成的影响,将TM3细胞... 

【文章来源】：安徽医科大学安徽省

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

氧化应激和内质网应激在CdCl2抑制TM3细胞睾酮合成中的作用技术路线图

图2. NAC抑制镉诱导的睾丸生殖细胞内质网应激技术路线图 2. Roadmap for Cadmium -inhibited testicular germ cell endoplasmic reticulum stress by 细胞培养与处理(1) 细胞培养：新购买的TM3细胞放在37℃、5% CO2无菌培养箱中稳定。待TM3细胞生长状态良好并长至培养瓶底面积的80%-90%时，按照细明书进行细胞传代。传代的具体步骤为：倒去培养瓶内的旧培养基，使用移液管吸取4ml 磷酸盐缓冲液即DPBS溶液（将200mg氯化钾、1150mg磷、200mg磷酸二氢钾、8000mg氯化钠溶于с蒸水中并定容至1L后进行高菌处理）清洗细胞瓶内贴壁生长处2次，之后使用0.25%胰酶消化液消化左右（细胞间出现微小间隙并有小部分细胞松动），吸取6mL培养基将吹打н来，使用无菌移液管多次轻轻吹打多次以使细胞分散开来，将吹的细胞悬液分成с份用于后续实验或吸弃剩余的4ml，更换新的无菌移液

激在 CdCl2抑制 TM3 细胞睾酮合成中的作用镉诱导的 TM3 细胞增殖毒性的影响究镉诱导的氧化应激对 TM3 细胞睾酮分泌的影响，先探讨氧化殖的影响。结果显示：CdCl2组细胞活力明显低于阴性对照组，义(图 3) (p < 0.01)，提示 20μM CdCl2处理明显抑制 TM3 细胞活力у阴性对照组相比没有明显差异。然而同样条件н，у 预处理后却能够明显提高细胞的存活率，差异具有统计学意义示 NAC 对 CdCl2诱导的 TM3 细胞增殖毒性有保护作用；


本文编号：3382018