氯乙烯亚慢性染毒对大鼠肝组织和外周血周期相关microRNAs表达的影响

发布时间：2017-05-01 16:09

  本文关键词：氯乙烯亚慢性染毒对大鼠肝组织和外周血周期相关microRNAs表达的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:检测氯乙烯染毒大鼠肝组织中周期相关miRNAs(mir-122、mir-125b、mir-192、mir-195、mir-21)表达的改变,探讨其在肝细胞周期改变中的作用;同时检测血清中相应miRNAs的表达,为氯乙烯暴露早期标志物的研究提供依据。方法:1.动物处理:按体重将96只SPF级雄性SD大鼠随机分为三个染毒组(5mg/kg组、25mg/kg组和125mg/kg组)和对照组,每组24只。采用腹腔注射相应体积的氯乙烯气体进行染毒,对照组注射25mg/kg清洁空气,每周3次。分别于染毒第6周、8周、12周末,每组随机选取8只大鼠收集肝组织和血液。2.肝细胞周期检测:新鲜肝组织约100mg制备细胞悬液,用预冷的70%乙醇4℃过夜固定细胞,然后用400μlPI染液暗处染色30min(期间摇晃数次),最后使用流式细胞仪进行检测。3.实时荧光定量PCR:将提取合格的RNA(肝组织提取200nt的小片段RNA,血清中提取总RNA)反转录合成cDNA,实时荧光定量(SYBR染料法)检测不同染毒时间各miRNAs的表达量。获得每个样本的扩增产物Ct值,结果采用2-△△Ct法计算各miRNAs相对于对照组的表达量。4.统计方法:所有数据均使用spss19.0进行整理和分析。对数据进行方差齐性检验;若方差齐,进行单因素方差分析,若方差不齐,进行秩和检验(Kruskal-Wallis H检验);检验水准为0.05。定量数据如服从正态分布,则以±s表示;不服从正态分布,则以中位数和四分位数间距表示。结果:1.大鼠状况:染毒期间,动物状况良好,没有出现明显中毒症状。2.肝细胞周期检测:第6周,125mg/kg组g0/g1期细胞百分比(75.61±9.10%)与对照组(66.83±9.30%)相比增加,且差异有统计学意义(p0.05);第8周,三个剂量组g0/g1期、s期和g2/m期细胞百分比与对照组相比均无统计学差异(p0.05);第12周,125mg/kg组s期细胞百分比(10.03±3.58%)与对照组(5.79±2.55%)相比增加,且差异有统计学意义(p0.05)。3.肝组织中mirnas的表达:5种mirnas的相对表达量均呈现出明显的剂量效应和时间效应。随着染毒剂量的增加:第6周,各mirnas的相对表达量显著上调(p0.05);第8周,mir-125b、mir-21的相对表达量显著下调(p0.05);第12周,各mirnas的相对表达量显著下调(p0.05)。随着时间的延长:对照组和5mg/kg组,各mirnas的相对表达量差异无显著性(p0.05);25mg/kg组和125mg/kg组,各mirnas的相对表达量显著下调(p0.05),且125mg/kg组下调更明显,但25mg/kg组mir-195的相对表达量各时间点差异无显著性(p0.05)。从染毒第8周开始,各mirnas在25mg/kg组和125mg/kg组的相对表达量均低于对照组(5mg/kg组与对照组相比表达略增高,但差异无统计学意义),且随着剂量的增加和时间的延长下调更加明显。4.血清中mirnas的表达:mir-122、mir-125b、mir-21的相对表达量均不显示显著的剂量效应和时间效应。mir-192相对表达量有显著的时间效应(p0.05),表现为先增加后降低,但两两比较无统计学差异;mir-195相对表达量有显著的时间效应(p0.05),表现为先降低后增加,但两两比较无统计学差异。5.肝组织和血清中mirnas相关性分析:进行肝组织和血清中表达的相关性分析,5种mirnas均未发现有显著相关性(p0.05)。结论:1.氯乙烯破坏肝细胞g1/s关卡,使肝细胞短时间停滞于g1期,随着时间的延长,细胞进入s期的比例增加。2.氯乙烯染毒6周,大鼠肝组织mirnas(mir-122、mir-125b、mir-192、mir-195、mir-21)表达上调,从第8周开始下调,并且到第12周时下调更加显著。3.肝组织mirnas(mir-122、mir-125b、mir-192、mir-195、mir-21)表达量的变化可能与肝细胞周期g1/s关卡调控有关。4.低丰度的mi RNAs可能在氯乙烯致肝损伤中发挥重要作用。5.在肝组织与血清中,miRNAs(mir-122、mir-125b、mir-192、mir-195和mir-21)表达量的变化不同。6.血清mir-192和mir-195可否作为氯乙烯早期暴露的标志物,还需要进一步研究证实。
【关键词】：氯乙烯 细胞周期 肝细胞 血清 microRNAs
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R114
【目录】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-14
• 第一部分 氯乙烯染毒大鼠肝细胞周期的检测14-23
• 1 材料与方法14-16
• 1.1 主要仪器与试剂14
• 1.2 实验动物14-15
• 1.3.肝细胞周期检测15
• 1.4.统计分析15-16
• 2 结果16-20
• 2.1 实验动物一般情况16-17
• 2.2 肝细胞周期分布17-20
• 3 讨论20-22
• 4 小结22-23
• 第二部分 氯乙烯染毒大鼠肝组织中miRNAs的表达情况23-37
• 1 材料与方法23-27
• 1.1 主要仪器和试剂23-24
• 1.2 实验方法24-26
• 1.3.统计分析26-27
• 2 结果27-33
• 2.1 小片段RNA提取质量27
• 2.2.肝组织5种miRNAs的扩增曲线和熔解曲线27-29
• 2.3.肝组织5种miRNAs的相对表达量29-33
• 3 讨论33-36
• 4 小结36-37
• 第三部分 氯乙烯染毒大鼠血清中miRNAs的表达情况37-47
• 1 材料与方法37-39
• 1.1 主要仪器和试剂37
• 1.2 实验方法37-38
• 1.3 统计方法38-39
• 2 结果39-44
• 2.1 血清总RNA提取质量39
• 2.2.血清5种miRNAs的扩增曲线和熔解曲线39-41
• 2.3.血清5种miRNAs的相对表达量41-44
• 3 讨论44-46
• 4 小结46-47
• 本研究的创新与局限47-48
• 参考文献48-51
• 综述51-59
• 参考文献56-59
• 致谢59-60
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果60-61
• 个人简历61

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本文编号：339228