邻苯二甲酸单丁酯对雄性小鼠生殖毒性的研究

发布时间：2017-05-02 00:10

  本文关键词：邻苯二甲酸单丁酯对雄性小鼠生殖毒性的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：邻苯二甲酸酯类化合物(phthalate esters, PAEs)作为增塑剂大量存在于人们日常生活中,它主要作用是软化塑料和增强塑料的弹性,其毒性效应已得到人们的极大关注。在所有PAEs中,邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate, DBP)是污染最严重、机体内暴露水平最高的PAEs之一,当DBP被人体吸收以后,能水解成邻苯二甲酸单丁酯(Mono-Butyl phthalate, MBP),尿液PAEs代谢产物检测显示,DBP代谢产物MBP含量最高,有研究表明MBP具有多种毒性,对动物生殖和发育有一定的影响,但其作用机制目前不十分明确,尚需进一步的研究结果来阐明。本论文从个体水平、组织水平和分子水平三个层面的研究来探讨MBP的毒性效应及损伤机制,通过对MBP暴露之后的小鼠进行体重及脏器系数的检测,睾丸组织病理学切片的观察和精子密度及精子畸形率的检测,来评价MBP暴露对小鼠睾丸组织产生损伤的程度。通过对睾丸组织氧化应激指标(活性氧簇,ROS；丙二醛,MDA；谷胱甘肽,GSH),能量代谢相关酶活性(乳酸脱氢酶,LDH；琥珀酸脱氢酶,SDH)的变化和与睾丸组织的发育,精子的发生作用的相关基因(Sox9、DAZL、drmtl)表达量的检测来探讨MBP产生毒性的可能机制。在正常情况和使用保护剂对睾丸组织进行保护条件下,通过对MBP暴露之后小鼠的睾丸组织损伤以及毒性的研究,探讨MBP造成小鼠的睾丸组织损伤的可能机制,并通过添加褪黑素作为保护剂,来研究褪黑素在MBP暴露之后对睾丸组织的保护效果及保护机制。实验结果表明：随着MBP的暴露,在100mg/kg/day浓度组可以导致小鼠睾丸组织出现损伤,生精小管萎缩,管腔内各种生精细胞明显减少,在2OOmg/kg/d ay浓度组小鼠睾丸病变进一步加重,间质细胞排列稀疏,分裂异常,数目大量减少,精子密度及精子畸形率也出现了显著性的下降。在100mg/kg/day和200mg/kg/day浓度组睾丸组织内ROS水平和MDA含量出现了显著性的上升,而GSH水平出现了显著性的下降,LDH活性及SDH活性下降显著。从50mg/kg/dayk开始,相关基因Sox9、DAZL的表达量显著性的下调。添加褪黑素(50 mg/kg/day)作保护剂时,200 mg/kg/day MBP浓度组,褪黑素可以减轻小鼠睾丸组织的损伤,降低睾丸组织中精子畸形率,精子密度得到恢复,且可以降低氧化应激,提升相关能量代谢酶活性,从而使MBP对小鼠睾丸组织的损伤情况得到一定程度的改善。
【关键词】：邻苯二甲酸单丁酯 雄性生殖毒性 氧化应激 褪黑素
【学位授予单位】：华中师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要6-7
• Abstract7-11
• 1. 文献综述11-17
• 1.1 MBP简述11-14
• 1.1.1 PAEs简介11-12
• 1.1.2 MBP的理化性质12
• 1.1.3 MBP的污染来源及暴露评估12-14
• 1.2 MBP的研究进展14-16
• 1.2.1 有关对男性生殖功能影响的研究15
• 1.2.2 有关对女性发育影响的研究15-16
• 1.2.3 有关发育毒性的研究16
• 1.2.4 对肝脏和肾脏影响的研究16
• 1.3 选题的目的意义16-17
• 2. 材料与方法17-26
• 2.1 实验材料17-18
• 2.1.1 实验动物17
• 2.1.2 主要实验仪器17-18
• 2.1.3 主要试剂及试剂盒18
• 2.2 实验设计18-19
• 2.3 研究路线19
• 2.4 MBP对雄性小鼠生殖毒性研究的实验方法19-26
• 2.4.1 个体形态水平19-20
• 2.4.2 组织水平的研究20
• 2.4.3 细胞水平的研究20
• 2.4.4 分子水平的研究20-25
• 2.4.5 统计学分析25-26
• 3、实验结果26-41
• 3.1 不同浓度的MBP对小鼠体重的影响26-27
• 3.2 不同浓度的MBP对小鼠脏器系数的影响27
• 3.3 不同浓度的MBP对小鼠睾丸组织的影响27-28
• 3.4 不同浓度的MBP对小鼠精子密度的影响28-29
• 3.5 不同浓度的MBP对小鼠精子畸形率的影响29-30
• 3.6 不同浓度的MBP对小鼠睾丸组织ROS的影响30-31
• 3.7 不同浓度的MBP对小鼠睾丸组织MDA的影响31-32
• 3.8 不同浓度的MBP对小鼠睾丸组织GSH的影响32
• 3.9 不同浓度的MBP对小鼠睾丸组织SDH、LDH酶活力的影响32-33
• 3.10 RT-PCR实验结果33-37
• 3.10.1 MBP对小鼠睾丸sox9 mRNA表达的影响33-35
• 3.10.2 MBP对小鼠睾丸DAZL mRNA表达的影响35-36
• 3.10.3 MBP对小鼠睾丸drmt1 mRNA表达的影响36-37
• 3.11 添加褪黑素后MBP染毒实验结果37-41
• 3.11.1 添加褪黑素后MBP染毒对小鼠体重及脏器系数的影响37-38
• 3.11.2 添加褪黑素后MBP染毒对小鼠睾丸组织病理学观察结果38
• 3.11.3 添加褪黑素后MBP染毒对小鼠精子密度及畸形率的影响38-39
• 3.11.4 添加褪黑素后MBP染毒小鼠睾丸组织氧化应激水平39-40
• 3.11.5 添加褪黑素后MBP染毒小鼠睾丸组织SDH、LDH的影响40-41
• 4、讨论41-45
• 5、结论45-46
• 参考文献46-52
• 附录 缩略词表52-53
• 攻读学位期间发表的学术论文53-54
• 致谢54

【共引文献】

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本文编号：339911