应用转染细胞研究ERCC2/XPD基因多态与短波紫外线所致DNA损伤修复的关联

发布时间：2021-11-16 03:47

　　目的探讨ERCC2/XPD基因多态与短波紫外线（UVC）所致细胞DNA损伤与修复的关联。方法构建稳定表达ERCC2/XPD rs13181 AA（Lys751）和ERCC2/XPD rs13181 CC（Gln751）2种基因型的质粒,转染中国仓鼠卵巢细胞缺陷型UV5,获得稳定表达ERCC2转染细胞系。应用MTT法比较2种不同基因型转染细胞经不同照射强度UVC处理后细胞抑制率的差别;应用改良彗星试验检测各转染细胞经UVC处理后1、3、6、24 h DNA损伤修复能力的差异。结果与UV5ERCC2（AA）相比,突变型细胞UV5^{ERCC2（CC）}对UVC所致DNA损伤更加敏感,细胞存活率降低（P<0.05）。改良彗星试验结果显示,UV5^{ERCC2（CC）}细胞DNA损伤程度较UV5ERCC2（AA）严重,且修复UVC所致DNA损伤的能力降低,在20 J/m2UVC处理3、6 h时点的差异有统计学意义（P<0.05）。结论 ERCC2/XPD rs13181多态C等位基因与UVC所致DNA损伤修复能力下降相关,提示ERCC2/XPD rs... 

【文章来源】：中国医科大学学报. 2016,45(12)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 细胞:
        1.1.2 主要试剂:
        1.1.3主要仪器
    1.2 实验方法
        1.2.1 细胞培养及处理:
        1.2.2 ERCC2/XPD 751位点不同基因型转染细胞的建立:
        1.2.3 转染细胞的鉴定:
            1.2.3. 1 镜下观察转染效率
            1.2.3. 2 Western blotting检测ERCC2/XPD蛋白表达
            1.2.3. 3 Taq Man#real-time PCR法检测ERCC2/位点
        1.2.4 DNA损伤修复能力的检测:
            1.2.4. 1 细胞抑制率试验
            1.2.4. 2 改良彗星试验
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 ERCC2/XPD在各转染细胞系中的表达(图1)
    2.2 Western blotting验证ERCC2/XPD在各细胞中的表达
    2.3 转染细胞ERCC2/XPD rs13181基因型的确定
    2.4 UVC对UV5ERCC2(AA)和UV5ERCC2(CC)细胞存活率的影响
    2.5 UVC所致UV5ERCC2(AA)和UV5ERCC2(CC)细胞的DNA损伤与修复
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]核苷酸切除修复基因多态性与肺癌发生风险的研究进展[J]. 金珊珊,陈小岚,刘惠,王兴友.  医学综述. 2016(11)
[2]紫外线对皮肤角质形成细胞DNA的损伤效应以及白藜芦醇的保护作用[J]. 刘红霞,周良,丁振华.  实用医学杂志. 2015(23)
[3]ERCC2/XPD基因缺失对短波紫外线所致CHO细胞DNA损伤修复的影响[J]. 关阳阳,肖莎,李丹丹,薛萍,张国培,刘秋芳,靳翠红,杨敬华,巫生文,逯晓波.  卫生研究. 2014(01)



本文编号：3498090