H19/SAHH调控OGG1甲基化对BaP致人肺源性细胞DNA氧化损伤的影响
发布时间：2021-11-18 03:11
目的:探讨长链非编码RNA（Long non-coding RNA,lnc RNA）H19与S-腺苷高半胱氨酸水解酶（S-adenosylhomocysteine hydrolase,SAHH）相互作用调控8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1（8-oxoguanine DNA glycosylase 1,OGG1）甲基化水平在苯并[a]芘（Benzo[a]pyrene,Ba P）致人肺源性细胞（16HBE、BEAS-2B、VA13）DNA氧化损伤过程中的作用,以期为揭示Ba P暴露致DNA损伤的表观遗传调控机制提供相应线索。方法:通过si RNA技术降低人肺源性细胞中H19及SAHH的表达水平,构建H19低表达、SAHH低表达和H19及SAHH双低表达细胞模型,同时设置转染阴性序列对照组;通过质粒转染技术（载体p CMV-GV141）过表达人肺源性细胞中SAHH的表达水平,构建SAHH过表达细胞模型（wild type（WT）-SAHH、M1-SAHH,M2-SAHH,M3-SAHH）,同时设置转染空质粒对照组。用不同浓度Ba P（0、1、2、4、8、16、32μmol/L）染毒24h,以16...
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
腺苷标准曲线
图 2 OGG1 甲基化检测位点及序列将 110mL 70%乙醇、110mL 1×Wash Buffer、90mL Denaturation Buffer、10纯水倒入相应的 5 个清洗槽；打开并设置 80℃金属浴，将 Plate Holder 放；轻柔混匀 Sepharose Beads，配置 Sepharose Beads 和 Binding Buffer 的 M孔反应尖底板 80μL 体系（常温 1400rpm 水平振荡混匀 20min）：Sephads 3μL，DNA 扩增样品 15μL，Binding Buffer 40μL，Water 20μL。96 孔底板 40μL 体系：annealing Buffer 38.4μL，10μM 测序引物 1.6μL。PyroM6 软件设置好运行程序，按照程序要求在试剂舱加入相应试剂，并把试剂PyroMark Q96 中；打开 vacuum prep workstation 的泵，将 vacuum prep to纯水中清洗 3 次（最后一次抽干）；vacuum prep tool 移到 96 孔反应尖底Sepharose Beads，然后依次放入 70%乙醇 5s、Denaturation Buffer 5s、1×Wffer 10s（注意需待液体顺畅通过后进行计时）；取出并竖直 vacuum prep
板中染毒结束后，D-hanks 平衡盐溶液清至 1.5mL 离心管中，使用 8-OHdG样，重复 3 次。DNA 20min，使用 1M Tris 将 pH 值调整为磷酸酶，37°C 孵育 30min；沸水煮 10min，按照表 3 配制标准曲线 8 个梯度样品（倍为标准曲线稀释标品 H 的 OD 值，根据标型标准曲线（见图 3）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA修复基因可变剪接及非编码RNA调控网络作为恶性肿瘤发生及预后生物学标志的意义[J]. 逯晓波. 沈阳医学院学报. 2017(04)
[2]布鲁菌半胱氨酸水解酶在甲硫氨酸循环中的催化活性研究[J]. 徐达,吴小卡,荆雅玮,左佳坤,米荣升,黄燕,陈兆国,王成明,韩先干. 南京农业大学学报. 2017(04)
[3]H19基因在肿瘤研究领域的研究进展[J]. 王晓东,王晓娟,赵鹏飞,陈文捷,吴慧哲,魏敏杰. 复旦学报(医学版). 2017(02)
[4]苯并[a]芘诱发细胞恶性转化过程中基因组总体DNA甲基化改变[J]. 陶功华,庄志雄,杨淋清,龚春梅,刘庆成,刘建军,肖萍. 环境与职业医学. 2014(05)
[5]DNA甲基化的研究进展[J]. 谢松松,王宝峰,周宗瑶. 现代生物医学进展. 2009(17)
[6]DNA损伤修复过程表观遗传学改变[J]. 杨萍,李志芳,陈雯. 医学分子生物学杂志. 2009 (05)
[7]DNA修复的表观遗传学调控[J]. 黄庆雷,焦仁杰. 生物化学与生物物理进展. 2008(10)
[8]应用基因芯片技术筛查肺癌变相关基因的研究[J]. 吕嘉春,陈家堃,纪卫东,蒋义国,施侣元,吴中亮,何敏,曾波航. 中华医学杂志. 2003(24)
[9]DNA甲基化及其影响因素[J]. 陈瑞琳,蔺淑梅,陈天艳,张曦. 国际流行病学传染病学杂志. 2007 (04)
[10]表观遗传学及其研究进展[J]. 张梅光. 中华劳动卫生职业病杂志. 2008 (11)
本文编号：3502085
【文章来源】：山西医科大学山西省
【文章页数】：90 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
腺苷标准曲线
图 2 OGG1 甲基化检测位点及序列将 110mL 70%乙醇、110mL 1×Wash Buffer、90mL Denaturation Buffer、10纯水倒入相应的 5 个清洗槽；打开并设置 80℃金属浴，将 Plate Holder 放；轻柔混匀 Sepharose Beads，配置 Sepharose Beads 和 Binding Buffer 的 M孔反应尖底板 80μL 体系（常温 1400rpm 水平振荡混匀 20min）：Sephads 3μL，DNA 扩增样品 15μL，Binding Buffer 40μL，Water 20μL。96 孔底板 40μL 体系：annealing Buffer 38.4μL，10μM 测序引物 1.6μL。PyroM6 软件设置好运行程序，按照程序要求在试剂舱加入相应试剂，并把试剂PyroMark Q96 中；打开 vacuum prep workstation 的泵，将 vacuum prep to纯水中清洗 3 次（最后一次抽干）；vacuum prep tool 移到 96 孔反应尖底Sepharose Beads，然后依次放入 70%乙醇 5s、Denaturation Buffer 5s、1×Wffer 10s（注意需待液体顺畅通过后进行计时）；取出并竖直 vacuum prep
板中染毒结束后，D-hanks 平衡盐溶液清至 1.5mL 离心管中，使用 8-OHdG样，重复 3 次。DNA 20min，使用 1M Tris 将 pH 值调整为磷酸酶，37°C 孵育 30min；沸水煮 10min，按照表 3 配制标准曲线 8 个梯度样品（倍为标准曲线稀释标品 H 的 OD 值，根据标型标准曲线（见图 3）。
【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA修复基因可变剪接及非编码RNA调控网络作为恶性肿瘤发生及预后生物学标志的意义[J]. 逯晓波. 沈阳医学院学报. 2017(04)
[2]布鲁菌半胱氨酸水解酶在甲硫氨酸循环中的催化活性研究[J]. 徐达,吴小卡,荆雅玮,左佳坤,米荣升,黄燕,陈兆国,王成明,韩先干. 南京农业大学学报. 2017(04)
[3]H19基因在肿瘤研究领域的研究进展[J]. 王晓东,王晓娟,赵鹏飞,陈文捷,吴慧哲,魏敏杰. 复旦学报(医学版). 2017(02)
[4]苯并[a]芘诱发细胞恶性转化过程中基因组总体DNA甲基化改变[J]. 陶功华,庄志雄,杨淋清,龚春梅,刘庆成,刘建军,肖萍. 环境与职业医学. 2014(05)
[5]DNA甲基化的研究进展[J]. 谢松松,王宝峰,周宗瑶. 现代生物医学进展. 2009(17)
[6]DNA损伤修复过程表观遗传学改变[J]. 杨萍,李志芳,陈雯. 医学分子生物学杂志. 2009 (05)
[7]DNA修复的表观遗传学调控[J]. 黄庆雷,焦仁杰. 生物化学与生物物理进展. 2008(10)
[8]应用基因芯片技术筛查肺癌变相关基因的研究[J]. 吕嘉春,陈家堃,纪卫东,蒋义国,施侣元,吴中亮,何敏,曾波航. 中华医学杂志. 2003(24)
[9]DNA甲基化及其影响因素[J]. 陈瑞琳,蔺淑梅,陈天艳,张曦. 国际流行病学传染病学杂志. 2007 (04)
[10]表观遗传学及其研究进展[J]. 张梅光. 中华劳动卫生职业病杂志. 2008 (11)
本文编号：3502085
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