壬基酚暴露通过TGFβ RⅡ-Smad2/3信号通路影响小脑髓鞘发育的机制研究
发布时间：2021-12-23 06:09
目的:壬基酚（nonylphenol,NP）是典型的持久性有机污染物（Persistent Organic Pollutants,POPs）,对环境污染严重。中枢神经系统（central nervous system,CNS）在发育期对POPs非常敏感。越来越多的证据表明,孕哺期NP暴露会损害子代的CNS。髓鞘在小脑中蕴含丰富,它是CNS的基本和必要结构,而孕哺期NP暴露对子代小脑髓鞘的影响亟待开展。因此,我们建立了孕哺期NP暴露模型,研究NP对子代小脑依赖的运动功能及髓鞘发育的影响;研究少突胶质细胞（髓鞘形成细胞）增殖情况;在上述研究基础上,我们深入探讨了TGFβRIISmad2/3信号通路（调控少突胶质细胞增殖的信号通路）的变化与NP暴露引起子代小脑髓鞘损伤之间的关系。实验方法:将雄性SD大鼠随机分为对照组、NP处理组和阳性对照组。从妊娠第0天（gestational day 0,GD0）至子代出生后第21天（postnatal day 21,PND21）,NP染毒组通过灌胃给予不同剂量的NP（10,50 mg/kg/day,玉米油为溶剂）,对照组每天给予玉米油灌胃,阳性对照组除每...
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
-1，前爪抓力实验和转轮疲劳实验的结果
中国医科大学硕士学位论文9（P<0.05）（图3.1-2-B）。图3.1-2，仔鼠步态分析的结果注：图3.1-2-A为仔鼠前肢的步长结果图，3.1-2-B为仔鼠后肢的步长结果图。*，与对照组相比，P<0.05；**，与对照组相比，P<0.01。n=123.2孕哺期NP暴露对仔鼠小脑髓鞘发育的影响髓鞘是由少突胶质细胞围绕轴突形成的一种层膜结构，在小脑中大量存在，它能加速轴突的传导速度，从而影响小脑运动功能[20]。为了观察孕哺期NP暴露对子代小脑髓鞘形态的影响，我们进行了免疫荧光实验检测仔鼠小脑中MBP蛋白与PLP蛋白的表达情况。MBP和PLP是中枢神经系统中髓磷脂的两种主要成分，其含量大致相等。在PND40时镜下观察仔鼠小脑白质区两种蛋白免疫荧光染色。结果显示与对照组相比，孕哺期暴露于NP导致仔鼠小脑髓鞘长度和密度明显减少，且髓鞘密度减少随NP剂量增加而加重，且50mg/kg染毒组的密度减少程度接近VPA阳性对照组（图3.2）。
中国医科大学硕士学位论文10图3.2，仔鼠小脑白质周围髓鞘免疫荧光染色注：图3.2,红色为为仔鼠小脑PLP免疫荧光染色。图中标尺为100μm，放大倍数为10×20。图3.2,绿色为仔鼠小脑MBP免疫荧光染色。n=6。3.3孕哺期NP暴露激活仔鼠小脑TGFβRII-Smad2/3信号通路3.3.1孕哺期NP暴露激活仔鼠小脑的TGFβRII与p-Smad2/3TGFβ信号在少突胶质细胞前体细胞的增殖中起着关键作用[34][35]。而TGFβRII信号通路及其主要底物Smad2/3的激活阻止髓鞘发育成熟[29]。因此我们使用免疫印迹技术检测仔鼠小脑中TGFβRII和Smad2/3以及p-Smad2/3（Smad2/3的活性形式）蛋白的表达水平。结果显示，PND14时50mg/kgNP染毒组与VPA阳性对照组中，TGFβRII的表达水平均显著高于对照组，结果具有统计学意义（P<0.05）；其下游效应因子Smad2/3的表达水平在PND14时10mg/kg及50mg/kg染毒组与对照组相比轻微下降，但其结果没有统计学意义，三组总Smad2/3的水平也保持稳定。VPA阳性对照组与对照组相比表达减少，结果有统计学意义（P<0.05）；而在PND14时50mg/kg染毒组与VPA阳性对照组的p-Smad2/3表达水平高于对照组，结果具有统计学意义（P<0.05），VPA阳性对照组与对照组间的差异更显著（图3.3.1）。
本文编号：3547939
【文章来源】：中国医科大学辽宁省
【文章页数】：47 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
-1，前爪抓力实验和转轮疲劳实验的结果
中国医科大学硕士学位论文9（P<0.05）（图3.1-2-B）。图3.1-2，仔鼠步态分析的结果注：图3.1-2-A为仔鼠前肢的步长结果图，3.1-2-B为仔鼠后肢的步长结果图。*，与对照组相比，P<0.05；**，与对照组相比，P<0.01。n=123.2孕哺期NP暴露对仔鼠小脑髓鞘发育的影响髓鞘是由少突胶质细胞围绕轴突形成的一种层膜结构，在小脑中大量存在，它能加速轴突的传导速度，从而影响小脑运动功能[20]。为了观察孕哺期NP暴露对子代小脑髓鞘形态的影响，我们进行了免疫荧光实验检测仔鼠小脑中MBP蛋白与PLP蛋白的表达情况。MBP和PLP是中枢神经系统中髓磷脂的两种主要成分，其含量大致相等。在PND40时镜下观察仔鼠小脑白质区两种蛋白免疫荧光染色。结果显示与对照组相比，孕哺期暴露于NP导致仔鼠小脑髓鞘长度和密度明显减少，且髓鞘密度减少随NP剂量增加而加重，且50mg/kg染毒组的密度减少程度接近VPA阳性对照组（图3.2）。
中国医科大学硕士学位论文10图3.2，仔鼠小脑白质周围髓鞘免疫荧光染色注：图3.2,红色为为仔鼠小脑PLP免疫荧光染色。图中标尺为100μm，放大倍数为10×20。图3.2,绿色为仔鼠小脑MBP免疫荧光染色。n=6。3.3孕哺期NP暴露激活仔鼠小脑TGFβRII-Smad2/3信号通路3.3.1孕哺期NP暴露激活仔鼠小脑的TGFβRII与p-Smad2/3TGFβ信号在少突胶质细胞前体细胞的增殖中起着关键作用[34][35]。而TGFβRII信号通路及其主要底物Smad2/3的激活阻止髓鞘发育成熟[29]。因此我们使用免疫印迹技术检测仔鼠小脑中TGFβRII和Smad2/3以及p-Smad2/3（Smad2/3的活性形式）蛋白的表达水平。结果显示，PND14时50mg/kgNP染毒组与VPA阳性对照组中，TGFβRII的表达水平均显著高于对照组，结果具有统计学意义（P<0.05）；其下游效应因子Smad2/3的表达水平在PND14时10mg/kg及50mg/kg染毒组与对照组相比轻微下降，但其结果没有统计学意义，三组总Smad2/3的水平也保持稳定。VPA阳性对照组与对照组相比表达减少，结果有统计学意义（P<0.05）；而在PND14时50mg/kg染毒组与VPA阳性对照组的p-Smad2/3表达水平高于对照组，结果具有统计学意义（P<0.05），VPA阳性对照组与对照组间的差异更显著（图3.3.1）。
本文编号：3547939
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/yufangyixuelunwen/3547939.html
