镉抑制卵母细胞MI期进程中MPF的活性及其相关基因的表达

发布时间：2017-05-11 10:02

  本文关键词：镉抑制卵母细胞MI期进程中MPF的活性及其相关基因的表达，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的通过观察卵母细胞MI期即GV期至第一极体释放进程中,不同剂量镉暴露卵母细胞不同时间后,卵母细胞成熟促进因子(MPF)活性及其相关基因—Cdk1、Ccnb1、Cdc25b的变化,探讨镉是否通过改变MPF相关基因的表达调节MPF的活性,进而影响卵母细胞MI期的进程。方法28日龄的清洁级ICR雌性小鼠腹腔注射PMSG 10 IU/只,48小时后处死,取生发泡期卵母细胞于体外暴露镉0 h、6 h、9 h,镉暴露剂量分别为0μM、0.05μM、0.5μM、2.5μM、5μM;用体视显微镜分别观察0 h、6 h、9 h各剂量组卵母细胞的形态学变化;分别收集0 h、6 h、9 h各剂量组的卵母细胞,采用ELISA法检测卵母细胞MPF活性;采用Real time-PCR方法和Western-blot法检测各暴露时间点、各剂量组卵母细胞的Cdk1、Ccnb1、Cdc25b的m RNA及蛋白表达情况。结果1、镉暴露小鼠卵母细胞MI期进程中不同暴露剂量、不同暴露时间点的细胞形态观察:0 h Cd组每个卵母细胞均可见清晰的细胞核,核大,外包完整的细胞膜,卵母细胞外包裹着层透明带,此时的卵母细胞即为GV(Germinal vesicle)期的卵母细胞。对照组卵母细胞体外培养6 h可见卵母细胞基本都发生了生发泡破裂(Germinal vesicle breaking down,GVBD),个别细胞可见卵周隙(卵母细胞与透明带之间的距离)变宽;对照组体外培养9 h可见卵母细胞均已发生GVBD,少量细胞可见第一极体排出;0.05μM Cd组、0.5μM Cd组镉暴露6h,均可见大量的卵母细胞发生GVBD,但仍有少量卵母细胞可见明显的细胞核;2.5μM Cd组、5μM Cd组镉暴露6 h较0.05μM Cd组、0.5μM Cd组有更多的卵母细胞可见明显的细胞核;0.05μM Cd组、0.5μM Cd组、2.5μM Cd组、5μM Cd组镉暴露9 h可见卵母细胞基本都已发生GVBD,但仍有个别卵母细胞可见细胞核;其中,0.05μM Cd组、0.5μM Cd组可见少量卵母细胞卵周隙变宽。2、镉暴露小鼠卵母细胞MI期进程中对MPF活性的影响:(1)同一暴露剂量,不同暴露时间:0μM Cd组,随着培养时间的延长MPF活性呈先上升后下降的趋势;与0 h比较,MPF活性在6 h和9 h均上升,差异具有统计学意义(P0.05);9 h与6 h比较MPF活性降低,差异具有统计学意义(P0.05);余各染毒剂量组,随着镉暴露时间的延长MPF活性呈上升趋势;与0 h比较,MPF活性在培养6 h和9 h均上升,差异具有统计学意义(P0.05);(2)同一暴露时间,不同暴露剂量:随着染镉剂量的增加,MPF的活性呈先上升后下降的趋势;其中暴露6 h,0.05μM Cd组、0.5μM Cd组MPF活性高于对照组,差异具有统计学意义(P0.01);暴露9 h,各染毒组MPF活性均高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);3、镉暴露小鼠卵母细胞MI期进程中对Cdk1 m RNA及蛋白表达的影响:(1)同一暴露剂量,不同暴露时间:Cdk1 m RNA表达,0μM Cd组,9 h与0 h比较表达下调,差异具有统计学意义(P0.01);0.05μM Cd组和5μM Cd组,随着镉暴露时间的延长表达呈上升趋势;与0 h比较,在6 h和9 h表达均上调,差异具有统计学意义(P0.01);0.5μM Cd组、2.5μM Cd组,Cdk1 m RNA在6 h表达下调,9 h表达又明显上调,差异具有统计学意义(P0.01);CDK1蛋白表达,0μM Cd组,6 h和9 h与0h比较差异均无统计学意义(P0.05);各染毒剂量组随着镉暴露时间的延长蛋白表达呈上升趋势;与0 h比较,各染毒组在6 h和9 h蛋白表达均上调,差异具有统计学意义(P0.01);(2)同一暴露时间,不同暴露剂量:①暴露6 h,Cdk1 m RNA表达,与对照组比较,0.05μM Cd组、5μM Cd组表达上调,0.5μM Cd组、2.5μM Cd组表达下调,差异具有统计学意义(P0.01);CDK1蛋白表达,各染毒组随着染镉剂量的增加呈先上升后下降的趋势,与对照组比较,各染毒组表达均上调,差异具有统计学意义(P0.01);②暴露9 h,各染毒组Cdk1 m RNA及蛋白表达随着染毒剂量的增加呈先上升后下降的趋势;与对照组比较,各染毒组m RAN及蛋白表达均上调,差异具有统计学意义(P0.01);4、镉暴露小鼠卵母细胞MI期进程中对Ccnb1 m RNA及蛋白表达的影响:(1)同一暴露剂量,不同暴露时间:0μM Cd组,随着培养时间的延长m RNA和蛋白表达呈先上升后下降的趋势;与0 h比较,6 h和9 h m RAN和蛋白表达上调,差异均具有统计学意义(P0.05);9 h与6 h比较表达下调,差异具有统计学意义(P0.01);各染毒剂量组随着镉暴露时间点延长m RNA和蛋白表达呈上升的趋势;与0 h比较,6 h和9 h表达上调,差异均具有统计学意义(P0.05);(2)同一暴露时间,不同暴露剂量:①暴露6 h,Ccnb1 m RNA表达,与对照组比较,0.05μM Cd组、5μM Cd组表达均上调,0.5μM Cd组、2.5μM Cd组表达下调,差异具有统计学意义(P0.01);CCNB1蛋白表达,各染毒组随着染毒剂量的增加呈先上升后下降的趋势;与对照组比较,各染毒组表达均上调,差异具有统计学意义(P0.01);②暴露9 h,各染毒组Ccnb1 m RNA和蛋白表达随着染毒剂量的增加呈先上升后下降的趋势;与对照组比较,各染毒组表达均上调,差异具有统计学意义(P0.01);5、镉暴露小鼠卵母细胞MI期进程中对Cdc25b m RNA及蛋白表达的影响:(1)同一暴露剂量,不同暴露时间:各剂量组Cdc25b m RNA及蛋白表达随着培养及染得时间的延长呈上升趋势;与0 h比较,6 h和9 h表达均上调,差异均具有统计学意义(P0.01);(2)同一暴露时间,不同暴露剂量:①暴露6 h,Cdc25b m RNA表达,与对照组比较,0.05μM Cd组、5μM Cd组表达均上调,0.5μM Cd组、2.5μM Cd组表达下调,差异具有统计学意义(P0.05);CDC25B蛋白表达,各染毒组随着染毒剂量的增加呈先上升后下降的趋势;与对照组比较,各染毒组表达均上调,差异具有统计学意义(P0.01);②暴露9 h,各染毒组Cdc25b m RNA和蛋白表达随着染毒剂量的增加呈先上升后下降的趋势;与对照组比较,各染毒组表达均上调,差异具有统计学意义(P0.01);结论在本实验条件下:1、镉暴露卵母细胞MI期进程中,可使卵母细胞阻滞于MI期,抑制卵母细胞第一极体的排出;2、镉暴露卵母细胞MI期进程中可使MPF维持在高活性状态,破坏MPF活性的周期性变化,从而使卵母细胞阻滞于MI期;3、卵母细胞MI期进程中,镉的暴露可促进MPF的催化亚基CDK1及调节亚基CCNB1的合成,促进MPF活化的激动剂CDC25B合成,这可能是使MPF维持在高活性的分子机制,最终使卵母细胞无法完成减数分裂。
【关键词】：镉 卵母细胞培养 卵母细胞成熟 MPF 蛋白
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114
【目录】：

• 英文缩写词汇表4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-13
• 前言13-16
• 技术路线16-17
• 引言17
• 材料与方法17-28
• 1 材料17-21
• 2 方法21-28
• 3 资料及数据统计分析28
• 结果与分析28-48
• 1 镉暴露小鼠卵母细胞 MI 期进程中不同剂量组、不同时间点的细胞形态学观察28-31
• 2 镉暴露小鼠卵母细胞 MI 期进程中对 MPF 活性的影响31-33
• 3 镉暴露卵母细胞 MI 期进程中对卵母细胞 MPF 相关基因的影响33-48
• 讨论48-54
• 1 镉暴露小鼠卵母细胞 MI 期进程中的影响48-49
• 2 MPF 活性及其相关基因（Cdk1、Ccnb1、Cdc25b）表达在镉暴露小鼠卵母细胞 MI 期进程中的意义49-54
• 结论54-55
• 参考文献55-60
• 致谢60-61
• 综述61-69
• 参考文献66-69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 赵涵;李媛;高选;陈子江;;人类卵母细胞减数分裂进程及形态学研究[J];解剖学报;2006年04期

2 张帆;张纯;郑洁;何联;;镉对未成年雌性大鼠卵泡发育的影响[J];山东医药;2013年47期

3 沈维干,季全兰,李朝军,荀爱华,陈兰;镉对小鼠卵母细胞成熟和体外受精的影响[J];中国环境科学;1999年06期

  本文关键词：镉抑制卵母细胞MI期进程中MPF的活性及其相关基因的表达，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：356998