PGE2在MEHP影响大鼠卵巢颗粒细胞凋亡中的作用及其机制
发布时间：2022-02-18 08:39
目的:明确DEHP体内代谢产物MEHP暴露对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响;探讨PGE2在MEHP所致大鼠卵巢颗粒细胞凋亡中的作用及其机制,为预防DEHP引起的雌性生殖毒性,保护女性生殖健康提供科学依据。方法:使用DMEM-F12培养基+10%胎牛血清原代培养大鼠卵巢颗粒细胞,采用免疫荧光法对大鼠卵巢颗粒细胞进行纯度检测,CCK-8法检测细胞存活率,根据预实验结果设置实验分组与MEHP染毒剂量为:空白对照组、溶剂对照组（0.25‰DMSO）、200μM MEHP染毒组、250μM MEHP染毒组、300μM MEHP染毒组和350μM MEHP染毒组。流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot法检测凋亡相关蛋白（BAX、BCL-2、Caspase 3、Caspase 7）、PGE2受体（PTGER 2和PTGER 4）和PGE2下游基因（Gαs、cAMP、HAS2、TNFAIP6）的蛋白表达水平;Real-time PCR法检测凋亡相关基因（BAX、BCL-2）、PGE2受体基因（PTGER 2和PTGER 4）和PGE2下游基因（Gαs、cAMP、HAS2、TNFAIP6）的mR...
【文章来源】：吉林大学吉林省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 前言
1.1 DEHP与MEHP概述
1.2 DEHP及MEHP对卵泡发育的影响
1.3 DEHP及MEHP对排卵的影响
1.4 DEHP及MEHP对类固醇激素分泌的影响
1.5 DEHP及MEHP对卵巢颗粒细胞的影响
1.6 PGE2在卵巢颗粒细胞凋亡中的作用及机制
第2章 材料和方法
2.1 主要仪器及试剂
2.1.1 主要仪器
2.1.2 主要仪器
2.2 大鼠卵巢颗粒细胞原代培养
2.2.1 大鼠卵巢颗粒细胞提取
2.2.2 大鼠卵巢颗粒细胞传代培养及种板
2.2.3 大鼠卵巢颗粒细胞鉴定
2.3 MEHP染毒剂量的确定与分组
2.4 PGE2剂量的确定与分组
2.5 大鼠卵巢颗粒细胞凋亡检测
2.6 Western Blot法检测蛋白表达水平
2.6.1 大鼠卵巢颗粒细胞中总蛋白的提取
2.6.2 蛋白浓度的测定
2.6.3 蛋白表达水平检测
2.7 实时荧光定量PCR法检测mRNA表达
2.7.1 大鼠卵巢颗粒细胞总mRNA提取
2.7.2 逆转录
2.7.3 实时荧光定量PCR
2.8 ELISA法检测PGE2激素水平
2.9 数据处理与分析
第3章 结果
3.1 大鼠卵巢颗粒细胞形态学观察
3.2 原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞鉴定
3.3 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞存活率的影响
3.4 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响
3.5 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞中PGE2激素水平的影响
3.6 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关基因BAX、BCL-2表达的影响
3.6.1 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞BAX、BCL-2蛋白表达水平的影响
3.6.2 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞BAX、BCL-2 mRNA表达水平的影响
3.7 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关基因Cle-Caspase 3、Cle-Caspase 7蛋白表达的影响
3.8 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞PGE2受体表达的影响
3.8.1 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞PGE2受体蛋白表达水平的影响
3.8.2 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞PTGER 2和PTGER 4 mRNA表达水平的影响
3.9 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞中PGE2下游基因表达的影响
3.9.1 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞PGE2下游蛋白表达水平的影响
3.9.2 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞PGE2下游基因mRNA表达水平的影响
3.10 外源性PGE2对卵巢颗粒细胞存活率的影响
3.11 PGE2在MEHP影响卵巢颗粒细胞凋亡相关基因mRNA表达中的作用
3.12 PGE2在MEHP影响卵巢颗粒细胞PGE2受体基因mRNA表达中的作用
3.13 PGE2在MEHP影响卵巢颗粒细胞PGE2下游基因mRNA表达中的作用
第4章 讨论
4.1 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞存活及凋亡的影响
4.2 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关基因的影响
4.3 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞PGE2及前列腺素受体表达的影响
4.4 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞PGE2下游基因表达的影响
4.5 PGE2在MEHP影响大鼠卵巢颗粒细胞凋亡基因表达中的作用
第5章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]哺乳动物卵巢卵泡发育调控机制研究进展[J]. 张焱,张华. 生理学报. 2020(01)
[2]人类未成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究[J]. 邢琼,章志国,周平,赵济华,曹云霞. 生殖与避孕. 2008(10)
博士论文
[1]蛋鸡退化卵泡衰退的机制及其功能的研究[D]. 林欣.浙江大学 2018
[2]miR-26b调控猪卵泡颗粒细胞凋亡机制[D]. 刘吉英.南京农业大学 2016
[3]DEHP及其代谢产物MEHP对雌性大鼠生殖毒性及相关机制研究[D]. 李娜.吉林大学 2013
[4]大鼠卵巢颗粒细胞体外生殖毒性评价替代模型的建立与应用[D]. 邬静.湖南农业大学 2011
[5]邻苯二甲酸酯类和多环芳烃类代表物质联合雌性生殖毒性与健康风险评价研究[D]. 许川.第三军医大学 2009
[6]大、小鼠卵泡培养方法及其在雌性生殖毒性研究中的应用[D]. 万旭英.第二军医大学 2008
硕士论文
[1]Wnt/β-catenin协同褪黑素、PI3K信号通路对猪卵巢颗粒细胞发育的影响[D]. 杨有福.西北农林科技大学 2018
[2]不孕女性邻苯二甲酸酯类代谢产物暴露与试管婴儿结局的相关性研究[D]. 杜瑶瑶.华中科技大学 2016
[3]TSG-6对人病理性瘢痕成纤维细胞增殖与凋亡的作用及其机制[D]. 张苏文.安徽医科大学 2016
[4]邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯的卵巢毒性及其分子机制研究[D]. 谭琴.深圳大学 2015
[5]DEHP对大鼠孕酮合成及StAR、P450scc基因表达影响的研究[D]. 刘淑敏.武汉科技大学 2014
[6]PGE2对子宫内膜异位症患者黄素化颗粒细胞增殖与凋亡的影响[D]. 申鑫鑫.河北医科大学 2012
本文编号：3630524
【文章来源】：吉林大学吉林省211工程院校985工程院校教育部直属院校
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
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摘要
Abstract
第1章 前言
1.1 DEHP与MEHP概述
1.2 DEHP及MEHP对卵泡发育的影响
1.3 DEHP及MEHP对排卵的影响
1.4 DEHP及MEHP对类固醇激素分泌的影响
1.5 DEHP及MEHP对卵巢颗粒细胞的影响
1.6 PGE2在卵巢颗粒细胞凋亡中的作用及机制
第2章 材料和方法
2.1 主要仪器及试剂
2.1.1 主要仪器
2.1.2 主要仪器
2.2 大鼠卵巢颗粒细胞原代培养
2.2.1 大鼠卵巢颗粒细胞提取
2.2.2 大鼠卵巢颗粒细胞传代培养及种板
2.2.3 大鼠卵巢颗粒细胞鉴定
2.3 MEHP染毒剂量的确定与分组
2.4 PGE2剂量的确定与分组
2.5 大鼠卵巢颗粒细胞凋亡检测
2.6 Western Blot法检测蛋白表达水平
2.6.1 大鼠卵巢颗粒细胞中总蛋白的提取
2.6.2 蛋白浓度的测定
2.6.3 蛋白表达水平检测
2.7 实时荧光定量PCR法检测mRNA表达
2.7.1 大鼠卵巢颗粒细胞总mRNA提取
2.7.2 逆转录
2.7.3 实时荧光定量PCR
2.8 ELISA法检测PGE2激素水平
2.9 数据处理与分析
第3章 结果
3.1 大鼠卵巢颗粒细胞形态学观察
3.2 原代培养的大鼠卵巢颗粒细胞鉴定
3.3 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞存活率的影响
3.4 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响
3.5 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞中PGE2激素水平的影响
3.6 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关基因BAX、BCL-2表达的影响
3.6.1 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞BAX、BCL-2蛋白表达水平的影响
3.6.2 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞BAX、BCL-2 mRNA表达水平的影响
3.7 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关基因Cle-Caspase 3、Cle-Caspase 7蛋白表达的影响
3.8 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞PGE2受体表达的影响
3.8.1 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞PGE2受体蛋白表达水平的影响
3.8.2 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞PTGER 2和PTGER 4 mRNA表达水平的影响
3.9 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞中PGE2下游基因表达的影响
3.9.1 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞PGE2下游蛋白表达水平的影响
3.9.2 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞PGE2下游基因mRNA表达水平的影响
3.10 外源性PGE2对卵巢颗粒细胞存活率的影响
3.11 PGE2在MEHP影响卵巢颗粒细胞凋亡相关基因mRNA表达中的作用
3.12 PGE2在MEHP影响卵巢颗粒细胞PGE2受体基因mRNA表达中的作用
3.13 PGE2在MEHP影响卵巢颗粒细胞PGE2下游基因mRNA表达中的作用
第4章 讨论
4.1 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞存活及凋亡的影响
4.2 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关基因的影响
4.3 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞PGE2及前列腺素受体表达的影响
4.4 MEHP对大鼠卵巢颗粒细胞PGE2下游基因表达的影响
4.5 PGE2在MEHP影响大鼠卵巢颗粒细胞凋亡基因表达中的作用
第5章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
【参考文献】：
期刊论文
[1]哺乳动物卵巢卵泡发育调控机制研究进展[J]. 张焱,张华. 生理学报. 2020(01)
[2]人类未成熟卵母细胞玻璃化冷冻研究[J]. 邢琼,章志国,周平,赵济华,曹云霞. 生殖与避孕. 2008(10)
博士论文
[1]蛋鸡退化卵泡衰退的机制及其功能的研究[D]. 林欣.浙江大学 2018
[2]miR-26b调控猪卵泡颗粒细胞凋亡机制[D]. 刘吉英.南京农业大学 2016
[3]DEHP及其代谢产物MEHP对雌性大鼠生殖毒性及相关机制研究[D]. 李娜.吉林大学 2013
[4]大鼠卵巢颗粒细胞体外生殖毒性评价替代模型的建立与应用[D]. 邬静.湖南农业大学 2011
[5]邻苯二甲酸酯类和多环芳烃类代表物质联合雌性生殖毒性与健康风险评价研究[D]. 许川.第三军医大学 2009
[6]大、小鼠卵泡培养方法及其在雌性生殖毒性研究中的应用[D]. 万旭英.第二军医大学 2008
硕士论文
[1]Wnt/β-catenin协同褪黑素、PI3K信号通路对猪卵巢颗粒细胞发育的影响[D]. 杨有福.西北农林科技大学 2018
[2]不孕女性邻苯二甲酸酯类代谢产物暴露与试管婴儿结局的相关性研究[D]. 杜瑶瑶.华中科技大学 2016
[3]TSG-6对人病理性瘢痕成纤维细胞增殖与凋亡的作用及其机制[D]. 张苏文.安徽医科大学 2016
[4]邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯的卵巢毒性及其分子机制研究[D]. 谭琴.深圳大学 2015
[5]DEHP对大鼠孕酮合成及StAR、P450scc基因表达影响的研究[D]. 刘淑敏.武汉科技大学 2014
[6]PGE2对子宫内膜异位症患者黄素化颗粒细胞增殖与凋亡的影响[D]. 申鑫鑫.河北医科大学 2012
本文编号：3630524
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