PI3K/Akt信号通路在染尘大鼠肺泡巨噬细胞自噬中作用

发布时间：2022-02-19 18:48

　　目的观察大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383细胞在染尘处理后的自噬情况,以LY294002阻断磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）途径,探讨PI3K/蛋白激酶B（Akt）信号通路在其自噬中的调控作用。方法 1常规培养NR8383细胞,分为空白组和染尘处理组,分别采用终浓度为0、50 mg/L的矽尘混悬液处理3、6、12、20和24 h后,收集细胞上清液,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和转化生长因子-β1（TGF-β1）水平,选择最佳染尘时间。2NR8383细胞分为对照组（予等体积不含血清的F-12K培养基处理）、矽尘组（予终浓度为50 mg/L矽尘混悬液处理）和干预组（予终浓度分别为50 mg/L、20μmol/L的矽尘混悬液和PI3K抑制剂LY294002处理）,孵育后收集样品。采用ELISA法检测孵育后20 h时间点细胞上清液中TNF-α和TGF-β1水平;采用蛋白免疫印迹方法测定孵育后20 h时间点细胞中Akt和自噬标记蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）的水平;采用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察孵育3、6、12和20 h时间点细胞自噬免疫荧光表达... 

【文章来源】：中国职业医学. 2016,43(03)北大核心

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 细胞、试剂和仪器
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养
        1.2.2 离体细胞染尘模型最佳染尘处理时间点选择
        1.2.3 细胞分组与处理
        1.2.4 ELISA法检测LY294002干预后细胞上清液中TNF-α和TGF-β1水平
        1.2.5 免疫印迹法检测LY294002干预后细胞中Akt和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达
        1.2.6 LSCM观察LY294002干预后细胞内自噬表达情况
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 NR8383细胞染矽尘处理最佳时间点选择
    2.2 LY294002干预后各组NR8383细胞上清液中TNF-α和TGF-β1表达情况
    2.3 LY294002干预后各组NR8383细胞中Akt和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达情况
    2.4 LY294002干预后NR8383细胞自噬表达情况
3 讨论



本文编号：3633430