m-TOR信号通路在慢性锰暴露致C57小鼠肝、脑损伤中的作用研究

发布时间：2022-02-20 21:38

　　目的:构建慢性锰暴露诱导的肝、脑损伤模型,探究细胞自噬与肝、脑损伤的相互联系以及m-TOR信号通路的调控作用与意义,为锰中毒的防治提供理论依据。方法:利用C57小鼠建立慢性锰暴露模型,同时使用自噬抑制剂三甲基腺嘌呤（3-MA）进行干预,造模结束后用行为学方法检测小鼠的行为学改变;原子吸收分光光度计检测血锰含量;全自动生化分析仪检测各组小鼠血清ALT、AST水平的变化;运用HE染色法观察几组小鼠肝脏形态学的改变;透射电子显微镜观察各组小鼠肝细胞、纹状体、黑质的损伤变化及自噬溶酶体的改变;TUNEL染色技术评估各组肝细胞的凋亡水平;Western blot检测自噬相关蛋白LC3-II、Beclin1以及m-TOR信号通路的表达情况。结果:1.动物实验结果表明锰会诱导小鼠肝脏自噬水平升高并且导致肝损伤,而且这一过程伴随着m-TOR以及其下游蛋白p70S6K的去磷酸化;2.与单独锰暴露相比,3-MA干预后能够降低肝脏ALT、AST水平（P<0.05）;3.HE染色与TUNEL染色显示,锰暴露组肝细胞间隙有较多炎性细胞浸润,肝双核细胞数量增多且肝细胞凋亡数量显著增高。3-MA干预后,锰暴露... 

【文章来源】：陕西中医药大学陕西省

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
引言
研究背景
    1 锰与锰毒性研究进展
        1.1 锰的生理功能
        1.2 国内锰中毒事件回顾
        1.3 锰的肝毒性
        1.4 锰的神经毒性
        1.5 锰诱导的心血管毒性
        1.6 锰毒性和个体易感性
        1.7 锰中毒机制
        1.8 锰中毒的临床治疗
    2 自噬
        2.1 自噬的概念
        2.2 自噬与各类疾病
        2.3 m-TOR通路与自噬
实验一 锰抑制m-TOR信号通路并诱导肝细胞自噬
    1 材料
    2 方法
        2.1 Mn中毒小鼠模型的构建
        2.2 血液和肝组织的收集
        2.3 肝组织蛋白的提取
        2.4 Western blot
        2.5 电镜观察
        2.6 统计学分析
    3 结果
        3.1 锰暴露后血锰升高
        3.2 锰暴露后ALT、AST增高
        3.3 锰暴露后线粒体出现损伤
        3.4 LC3-II、Beclin1 表达升高,m-TOR、p70S6K磷酸化表达下降
    4 讨论
实验二 3-MA对慢性Mn暴露诱导的肝细胞损伤的影响
    1 材料
    2 方法
        2.1 Mn中毒小鼠模型构建
        2.2 3-MA干预后血液和肝组织的收集
        2.3 HE染色
        2.4 TUNEL染色
        2.5 小鼠肝组织蛋白提取
        2.6 Western blot
        2.7 电镜观察
        2.8 统计学分析
    3 结果
        3.1 锰暴露后血锰升高
        3.2 抑制自噬后,ALT、AST表达情况
        3.3 抑制自噬后炎性细胞表达
        3.4 抑制自噬后线粒体损伤状况
        3.5 抑制自噬后细胞凋亡状况
        3.6 抑制自噬后m-TOR、P70表达状况
    4 讨论
实验三 抑制细胞自噬对慢性Mn暴露诱导的脑组织损伤的影响
    1 材料
    2 方法
        2.1 构建Mn中毒小鼠模型
        2.2 行为学检测(Pole Test)
        2.3 Mn暴露与3-MA干预后小鼠纹状体和黑质的收集
        2.4 小鼠肝组织蛋白提取
        2.5 Western blot
        2.6 电镜观察
        2.7 统计学分析
    3 结果
        3.1 自噬抑制后爬杆时间延长
        3.2 自噬抑制后线粒体损伤加重
        3.3 LC3-II、Beclin1 表达水平升高
    4 讨论
结语
参考文献
附录 缩略语表
致谢
在学期间主要研究成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]Autophagy and multidrug resistance in cancer[J]. Ying-Jie Li,Yu-He Lei,Nan Yao,Chen-Ran Wang,Nan Hu,Wen-Cai Ye,Dong-Mei Zhang,Zhe-Sheng Chen.  Chinese Journal of Cancer. 2017(08)
[2]锰中毒动物模型研究与应用进展[J]. 陈曾曾,王凤,闫永建.  中国职业医学. 2017(02)
[3]216例慢性锰中毒临床分析[J]. 王广松.  职业卫生与病伤. 2002(02)

硕士论文
[1]低水平锰暴露对工人血清炎症因子水平的影响[D]. 梁典胤.广西医科大学 2019



本文编号：3635852