葛根素在镉诱导大鼠肾小管上皮细胞线粒体自噬及细胞凋亡中的保护作用

发布时间：2022-08-07 23:33

　　镉作为环境中常见的重金属污染物,可引起多种器官和组织的损伤。近年来,随着镉生产、使用量的增加及工业污染加重,使得环境中镉含量快速上升,镉暴露造成的公众健康危害引起广泛关注。肾脏是镉毒性作用最主要靶器官之一,其中,肾小管是镉毒性损伤主要靶位点,机体长期接触镉将会造成肾脏不可逆损伤。葛根素是从植物野葛干燥根中提取的一种异黄酮类化合物,具有抗氧化、降血糖和改善微循环等药理活性,且毒性低、代谢快,安全可靠,在临床上被广泛用于治疗心血管疾病和糖尿病及并发症等。线粒体是细胞内重要的双层膜细胞器,除了为细胞正常生命活动提供必需能量外,还参与细胞分化、信号传递和细胞凋亡等过程。线粒体自噬被认为是线粒体质量和数量控制的主要途径。目前,葛根素与线粒体自噬在镉致肾脏毒性过程中的研究较少。本文以原代大鼠肾小管上皮细胞为模型,研究葛根素如何通过调控线粒体自噬在镉致细胞凋亡中发挥保护效应,为防止镉对肾脏的毒性作用提供新思路。1.镉对原代大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响采用机械碾磨结合胶原酶消化法获取原代大鼠肾小管上皮（rPT）细胞。在对数生长期,用不同浓度镉（0,1.25,2.5μM）处理rPT细胞12h,利用CCK... 

【文章页数】：74 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
缩略语
第一部分 文献综述
    1 镉的毒性作用研究进展
        1.1 镉的理化性质
        1.2 镉对环境的污染状况
        1.3 镉在体内的代谢
        1.4 镉的肾脏毒性
        1.5 镉致肾脏毒性早期诊断指标
    2 细胞凋亡与线粒体自噬研究进展
        2.1 镉致细胞凋亡及作用机制研究
        2.2 线粒体自噬研究进展
    3 葛根素
        3.1 葛根素简介
        3.2 葛根素抗氧化研究
    4 本研究目的意义
第二部分 试验研究
    第一章 镉对原代大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响
        1 材料
            1.1 实验动物和细胞
            1.2 主要化学试剂
            1.3 主要仪器
        2 方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 大鼠肾小管上皮节段组织的分离培养
            2.3 原代大鼠肾小管上皮细胞传代
            2.4 CCK-8法检测细胞存活率
            2.5 DAPI探针染色
            2.6 免疫印迹法检测相关蛋白表达量
            2.7 流式细胞术检测细胞凋亡率
            2.8 数据统计
        3 实验结果
            3.1 镉对rPT细胞存活率的影响
            3.2 镉对rPT细胞凋亡的影响
        4 讨论
    第二章 镉对原代大鼠肾小管上皮细胞线粒体自噬的影响
        1 材料
            1.1 实验动物和细胞
            1.2 主要化学试剂
            1.3 主要仪器
        2 方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 大鼠肾小管节段组织的分离培养
            2.3 原代大鼠肾小管细胞传代
            2.4 ATP含量检测
            2.5 流式细胞术检测MMP
            2.6 流式细胞术检测ROS含量
            2.7 透射电镜样品制备
            2.8 Mito-Tracker Red和Lyso-Tracker Green探针共标记
            2.9 QRT-PCR检测相关基因表达量
            2.10 免疫印迹法检测相关蛋白表达量
            2.11 数据统计
        3 实验结果
            3.1 镉对rPT细胞线粒体网状结构的影响
            3.2 镉对rPT细胞线粒体超微结构的影响
            3.3 镉对rPT细胞MMP、ATP及ROS含量的影响
            3.4 镉对rPT细胞线粒体自噬的影响
        4 讨论
    第三章 镉致原代大鼠肾小管上皮细胞损伤中线粒体自噬对细胞凋亡的影响
        1 材料
            1.1 实验动物和细胞
            1.2 主要化学试剂
            1.3 主要仪器
        2 方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 大鼠肾小管节段组织的分离培养
            2.3 原代大鼠肾小管细胞传代
            2.4 免疫印迹法检测相关蛋白表达量
            2.5 流式细胞术检测细胞凋亡率
            2.6 基因沉默
            2.7 数据统计
        3 实验结果
            3.1 镉与Mdivi共处理对线粒体自噬相关蛋白表达量的影响
            3.2 镉与Mdivi共处理对rPT细胞凋亡的影响
            3.3 镉与PINK1 siRNA共处理对线粒体自噬相关蛋白表达量的影响
            3.4 镉与PINK1 siRNA共处理对Cleaved caspase-3蛋白表达量的影响
        4 讨论
    第四章 葛根素对镉致原代大鼠肾小管上皮细胞线粒体自噬和细胞凋亡的影响
        1 材料
            1.1 实验动物和细胞
            1.2 主要化学试剂
            1.3 主要仪器
        2 方法
            2.1 溶液的配制
            2.2 大鼠肾小管节段组织的分离培养
            2.3 原代大鼠肾小管细胞传代
            2.4 CCK-8检测细胞存活率
            2.5 ATP检测
            2.6 流式细胞术检测MMP
            2.7 流式细胞术检测ROS含量
            2.8 DAPI探针染色
            2.9 流式细胞术检测细胞凋亡率
            2.10 Mito-Tracker Red和Lyso-Tracker Green探针共标记
            2.11 透射电镜样品制备
            2.12 QRT-PCR检测相关基因表达量
            2.13 免疫印迹法检测相关蛋白表达量
            2.14 数据统计
        3 实验结果
            3.1 葛根素与镉共处理对细胞存活率的影响
            3.2 葛根素与镉共处理对MMP、ROS及ATP含量的影响
            3.3 葛根素与镉共处理对线粒体网状结构的影响
            3.4 葛根素与镉共处理对细胞线粒体超微结构的影响
            3.5 葛根素与镉共处理对线粒体自噬的影响
            3.6 葛根素与镉共处理对细胞凋亡的影响
        4 讨论
全文结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]葛根素药理作用机制探讨及临床应用[J]. 徐兆景.  中国现代药物应用. 2016(08)
[2]土壤镉污染现状及危害研究进展[J]. 冉烈,李会合.  重庆文理学院学报(自然科学版). 2011(04)
[3]锰尾矿、矿渣浸出毒性及Cd、Pb溶出特性研究[J]. 王翔,付川,潘杰,程聪.  环境科学与管理. 2010(07)
[4]葛根素药理作用机制探讨及临床应用[J]. 姚丹,丁选胜.  中国临床药理学与治疗学. 2008(04)
[5]化肥行业镉问题的进展与建议[J]. 王江平.  磷肥与复肥. 2004(05)
[6]重金属镉对动物及人类的毒性研究进展[J]. 谢黎虹,许梓荣.  浙江农业学报. 2003(06)
[7]镉毒性研究进展[J]. 任继平,李德发,张丽英.  动物营养学报. 2003(01)
[8]葛根素对氧自由基的清除和抗氧化性损伤作用[J]. 朱庆磊,何爱霞,吕欣然.  解放军药学学报. 2001(01)
[9]葛根素的药理学和临床应用研究进展[J]. 朱庆磊,吕欣然.  中草药. 1997(11)
[10]葛根异黄酮的抗氧化作用[J]. 张光成,方思鸣.  中药材. 1997(07)

硕士论文
[1]葛根素对镉致大鼠肾脏损伤的保护效应[D]. 龙梦菲.扬州大学 2018
[2]长期低水平镉暴露致大鼠肾脏毒效应的研究[D]. 刘静静.东南大学 2017
[3]镉对大鼠肾小管上皮细胞的毒性作用及NAC的保护效应[D]. 曹瑾.扬州大学 2009
[4]氧化应激及Bcl-2在镉诱导的HEK293细胞凋亡机制中的研究[D]. 田婷.南京师范大学 2007



本文编号：3671243