绿原酸对LPS诱导小鼠肠上皮损伤的保护机制研究
发布时间：2022-12-09 05:23
位于肠隐窝底部的干细胞自我更新和分化形成祖细胞之间的动态平衡是维持肠上皮结构稳定的基础,利用谱系追踪的小鼠实验表明损伤后肠道干细胞和祖细胞在驱动肠上皮再生方面具有显著的可塑性。绿原酸（Chlorogenic acid,CGA）作为最有潜力的植物源性的食品功能成分,已受到广泛关注。基于细胞和动物模型的研究结果表明,绿原酸对机体肠道（细胞）损伤具有保护作用,但其作用机制尚不明确。本研究以脂多糖（LPS）诱导肠道损伤小鼠及肠道类器官为体内和体外研究模型,利用qPCR、Elisa、流式细胞分析技术、干细胞体外3D培养等技术相结合,探究了绿原酸在肠道损伤状态下,干细胞在肠上皮再生中的作用,揭示了绿原酸通过调节肠道干细胞功能实现其肠道上皮损伤保护机制。主要研究结果如下:（1）与对照组小鼠相比,绿原酸可以缓解凋亡阶段小鼠体重下降（对照组/绿原酸:小鼠体重分别下降1.0/0.6 g）,小肠长度缩短（33.0±0.9/36.0±0.3 cm）,小肠绒毛高度降低（712±9/737±18μm）;促进增殖阶段小肠绒毛高度恢复（对照组/绿原酸组:665±21/864±20μm）。除了小鼠体重和肠道结构外,与对...
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 引言
1.1 绿原酸
1.1.1 绿原酸的理化性质
1.1.2 绿原酸的分布
1.1.3 绿原酸的吸收与代谢
1.1.4 绿原酸的功能
1.2 肠道干细胞
1.2.1 肠道干细胞组成
1.2.2 肠道干细胞微环境
1.2.3 肠道干细胞与肠道损伤修复
1.3 肠道类器官
1.4 研究意义与内容
1.4.1 研究目的及意义
1.4.2 研究内容
第2章 绿原酸对LPS诱导的小鼠肠道组织形态及炎症反应的影响
2.1 前言
2.2 实验材料
2.2.1 实验动物
2.2.2 主要试剂
2.2.3 主要仪器设备
2.3 实验方法
2.3.1 小鼠体重及溶液摄入量测定
2.3.2 小鼠小肠组织的取材
2.3.3 冰冻切片的制备
2.3.4 HE染色
2.3.5 总RNA提取
2.3.6 cDNA合成
2.3.7 实时荧光PCR
2.3.8 ELISA
2.3.9 数据处理及分析
2.4 实验结果与讨论
2.4.1 绿原酸添加过程中小鼠体重、饮水量的变化
2.4.2 绿原酸对LPS诱导炎症小鼠小肠结构的影响
2.4.3 绿原酸对LPS诱导的肠道炎症反应的影响
2.4.4 绿原酸对LPS诱导的肠道上皮细胞凋亡的影响
2.5 结论
第3章 绿原酸对肠道干细胞功能的影响
3.1 前言
3.2 实验材料
3.2.1 实验动物
3.2.2 主要试剂
3.2.3 主要仪器设备
3.3 实验设计与方法
3.3.1 十二指肠隐窝的分离制备
3.3.2 肠道干细胞流式分析
3.3.3 肠道细胞增殖能力检测
3.3.4 实时荧光PCR
3.3.5 数据统计与分析
3.4 实验结果与分析
3.4.1 绿原酸对LPS诱导损伤小鼠分泌细胞和吸收细胞的影响
3.4.2 绿原酸对LPS诱导损伤小鼠a ISC和 rISC的影响
3.4.3 绿原酸对LPS诱导损伤小鼠紧密连接蛋白的影响
3.4.4 绿原酸对LPS诱导肠道损伤小鼠Lgr5+数量的影响
3.4.5 绿原酸对LPS诱导肠道损伤小鼠肠上皮细胞增殖及迁移功能的影响
3.5 结论
第4章 绿原酸对肠上皮损伤保护机制通路研究
4.1 前言
4.2 实验材料
4.2.1 实验动物
4.2.2 主要试剂
4.2.3 主要仪器设备
4.3 实验设计与方法
4.3.1 十二指肠隐窝的分离制备
4.3.2 十二指肠类器官培养
4.3.3 十二指肠类器官传代
4.3.4 绿原酸体外模拟消化
4.3.5 实时荧光PCR
4.3.6 数据统计与分析
4.4 实验结果与分析
4.4.1 绿原酸胃肠道消化率
4.4.2 肠道类器官绿原酸及炎症模型优化
4.4.3 绿原酸对LPS诱导肠道损伤小鼠JAK通路的影响
4.4.4 Tofacitinib抑制肠道类器官JAK信号通路模型优化
4.4.5 基于肠道类器官研究绿原酸在损伤环境下对吸收细胞和分泌细胞的影响
4.4.6 绿原酸通过JAK途径调节肠道干细胞
4.5 结论
第5章 总结与展望
5.1 总结
5.2 创新点
5.3 存在问题及展望
参考文献
致谢
本文编号：3714913
【文章页数】：87 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 引言
1.1 绿原酸
1.1.1 绿原酸的理化性质
1.1.2 绿原酸的分布
1.1.3 绿原酸的吸收与代谢
1.1.4 绿原酸的功能
1.2 肠道干细胞
1.2.1 肠道干细胞组成
1.2.2 肠道干细胞微环境
1.2.3 肠道干细胞与肠道损伤修复
1.3 肠道类器官
1.4 研究意义与内容
1.4.1 研究目的及意义
1.4.2 研究内容
第2章 绿原酸对LPS诱导的小鼠肠道组织形态及炎症反应的影响
2.1 前言
2.2 实验材料
2.2.1 实验动物
2.2.2 主要试剂
2.2.3 主要仪器设备
2.3 实验方法
2.3.1 小鼠体重及溶液摄入量测定
2.3.2 小鼠小肠组织的取材
2.3.3 冰冻切片的制备
2.3.4 HE染色
2.3.5 总RNA提取
2.3.6 cDNA合成
2.3.7 实时荧光PCR
2.3.8 ELISA
2.3.9 数据处理及分析
2.4 实验结果与讨论
2.4.1 绿原酸添加过程中小鼠体重、饮水量的变化
2.4.2 绿原酸对LPS诱导炎症小鼠小肠结构的影响
2.4.3 绿原酸对LPS诱导的肠道炎症反应的影响
2.4.4 绿原酸对LPS诱导的肠道上皮细胞凋亡的影响
2.5 结论
第3章 绿原酸对肠道干细胞功能的影响
3.1 前言
3.2 实验材料
3.2.1 实验动物
3.2.2 主要试剂
3.2.3 主要仪器设备
3.3 实验设计与方法
3.3.1 十二指肠隐窝的分离制备
3.3.2 肠道干细胞流式分析
3.3.3 肠道细胞增殖能力检测
3.3.4 实时荧光PCR
3.3.5 数据统计与分析
3.4 实验结果与分析
3.4.1 绿原酸对LPS诱导损伤小鼠分泌细胞和吸收细胞的影响
3.4.2 绿原酸对LPS诱导损伤小鼠a ISC和 rISC的影响
3.4.3 绿原酸对LPS诱导损伤小鼠紧密连接蛋白的影响
3.4.4 绿原酸对LPS诱导肠道损伤小鼠Lgr5+数量的影响
3.4.5 绿原酸对LPS诱导肠道损伤小鼠肠上皮细胞增殖及迁移功能的影响
3.5 结论
第4章 绿原酸对肠上皮损伤保护机制通路研究
4.1 前言
4.2 实验材料
4.2.1 实验动物
4.2.2 主要试剂
4.2.3 主要仪器设备
4.3 实验设计与方法
4.3.1 十二指肠隐窝的分离制备
4.3.2 十二指肠类器官培养
4.3.3 十二指肠类器官传代
4.3.4 绿原酸体外模拟消化
4.3.5 实时荧光PCR
4.3.6 数据统计与分析
4.4 实验结果与分析
4.4.1 绿原酸胃肠道消化率
4.4.2 肠道类器官绿原酸及炎症模型优化
4.4.3 绿原酸对LPS诱导肠道损伤小鼠JAK通路的影响
4.4.4 Tofacitinib抑制肠道类器官JAK信号通路模型优化
4.4.5 基于肠道类器官研究绿原酸在损伤环境下对吸收细胞和分泌细胞的影响
4.4.6 绿原酸通过JAK途径调节肠道干细胞
4.5 结论
第5章 总结与展望
5.1 总结
5.2 创新点
5.3 存在问题及展望
参考文献
致谢
本文编号：3714913
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