甲醛对HepG2细胞脂肪代谢的影响

发布时间：2017-05-16 18:21

  本文关键词：甲醛对HepG2细胞脂肪代谢的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 有动物实验研究发现甲醛可以致肝组织损伤和氧化损伤作用，流行病学研究也发现甲醛有致癌性。本课题组以HepG2（人肝癌细胞株）为模型，证实了甲醛可致肝细胞内甘油三酯含量增加，并通过检测甲醛染毒后HepG2细胞内与脂代谢相关蛋白的含量，寻找引起肝脏甘油三酯的积累和脂肪变化的可能机制，从而为预防甲醛的滥用保护人类健康提供理论依据。方法 人肝癌细胞株（HepG2）在含10%小牛血清的DMEM高糖培养基中培养，取对数生长期细胞接种于细胞培养板，分别以0.02、0.1、0.5、2.5、12.5mmol/L浓度的甲醛（Formaldehyde，FA）染毒液处理HepG2人肝癌细胞株24和48h，用CCK-8法进行细胞活性检测；采用GPO-POD酶法测定细胞内TG（甘油三酯）水平；用Hoechst33258进行核染色以观察细胞核形态学变化；检测蛋白时以0.004、0.02、0.1mmol/L浓度的甲醛处理人肝癌细胞HepG224和48h，采用Western blot法检测肉碱酯酰转移酶1（Carnitine palmitoyl transferase1，CPT1）、固醇调节元件结合蛋白-1（cSterol regulatory element-binding protern-1c，SREBP-1c）、SAR1A蛋白（Secretion-associated and Ras-related protein1A，SAR1A）、腺苷酸核糖基化因子1（ADP-ribosylation factor1，Arf1）、包被蛋白Ⅰ（Coat protein comlex Ⅰ，COPⅠ）、甘油三酯水解酶（Triacylglycerol hydrolase，TGH）和微粒体甘油三酯转运蛋白（Microsomaltriglyceride transfer protein，MTP）的蛋白表达水平；采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养上清中极低密度脂蛋白（VLDL）水平、载脂蛋白E（ApoE）和载脂蛋白B100（ApoB100）的分泌情况。结果 1、甲醛对HepG2细胞活性的影响：染毒24h后，0.5～12.5mmol/L FA作用组HepG2细胞D（470）值均低于阴性对照组（P0.05），且随着染毒浓度的增加，D（470）值逐渐降低，说明随着FA浓度的增加，对HepG2细胞活性的抑制作用逐渐增强。但0.02mmol/LFA剂量组肝细胞存活率明显高于阴性对照组，说明该剂量作用下FA对肝细胞有促进增殖作用。染毒48h后，0.1～12.5mmol/L FA作用组肝细胞活性均明显降低，进一步提示FA对肝细胞的活性抑制作用。 2、Hoechst33258染色结果：24h和48h处理后，0.5、2.5、12.5mmol/L FA组荧光染色后出现大量的核呈固缩状态或颗粒状的死亡细胞，10mmol/L CP阳性对照组同样出现致密浓染的细胞核，并且细胞数量明显减少，尤其是2.5～12.5mmol/L组和阳性对照组。阴性对照组和低剂量组细胞核荧光染色较浅，细胞核未固缩。 3、甲醛对HepG2细胞内甘油三酯含量的影响：经染毒24h后0.1mmol/L FA组与阴性对照组差异有统计学意义（P0.05）。48h后0.02和0.1mmol/L FA组与阴性对照组差异有统计学意义（P0.05）但是48h TG含量低于24h组，CP组TG含量48h较24h含量升高。 4、甲醛染毒对HepG2细胞CPT1和SREBP-1c蛋白表达影响：在FA染毒24h后，HepG2细胞CPT1表达无明显变化，48h后表达受到明显抑制；SREBP-1c表达水平在染毒24h和48h后均高于阴性对照组，提示FA接触初期仅促进HepG2细胞内脂肪合成，随着染毒时间的延长，对脂肪酸氧化的抑制也逐渐显现。 5、甲醛染毒对肝细胞TGH和MTP蛋白表达的影响：24h处理后0.1mmol/L甲醛和油酸组的TGH蛋白表达量明显增加，48h各处理组TGH表达量均显著低于阴性对照组。染毒48h后0.1mmol/L甲醛组MTP蛋白表达水平明显增加，与阴性对照组比较，差别有统计学意义（P0.05）。 6、甲醛染毒对肝细胞Arf1和COPⅠ、SAR1A蛋白表达的影响：甲醛处理24h后可引起肝细胞内Arf1和COPⅠ蛋白表达水平明显增加，处理48h后，Arf1蛋白表达水平趋于正常，而COPⅠ蛋白表达水平仍高于阴性对照组。这提示甲醛接触早期，肝细胞可通过增加Arf1和COPⅠ蛋白表达，促进VLDL的分泌而减少TG在细胞内的积累。随着染毒时间的延长，这种保护作用逐渐减弱。SAR1A水平未发现显著变化。 7、甲醛染毒对HepG2细胞上清中VLDL、ApoE和ApoB100含量的影响：染毒24h、48h后，各甲醛处理组细胞上清中的VLDL和ApoE含量无明显变化，与阴性对照组相比，无统计学差异（P0.05）。24h处理后，，0.1mmol/L甲醛组和油酸组ApoB100含量显著低于阴性对照组，48h后，0.02、0.1mmol/L甲醛组和油酸组ApoB100含量显著低于阴性对照组（P0.05），可能与细胞对ApoB100的再摄取有关。结论 1高浓度甲醛可引起肝细胞活性明显降低，甚至出现死亡。 2低浓度甲醛能够干扰肝细胞脂肪代谢，引起肝细胞内TG含量增加，其原因可能与甲醛抑制肝细胞的脂肪酸氧化，促进肝细胞TG合成有关。
【关键词】：甲醛 HepG2细胞 甘油三酯 肉碱酯酰转移酶1 固醇调节元件结合蛋白-1c 腺苷酸核糖基化因子1 包被蛋白Ⅰ 甘油三酯水解酶 微粒体甘油三酯转移酶 极低密度脂蛋白E 载脂蛋白B100
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【目录】：

• 中文摘要5-8
• Abstract8-11
• 中英文缩写词对照表11-12
• 前言12-14
• 第一章 材料与方法14-22
• 1.1 材料14-15
• 1.2 方法15-22
• 1.3 数据处理和统计学分析22
• 第二章 结果22-34
• 2.1 甲醛对 HepG2 细胞活性的影响22-23
• 2.2 Hoechst33258 细胞核荧光染色结果23-25
• 2.3 甲醛对 HepG2 细胞内甘油三酯（TG）含量的影响25-26
• 2.4 甲醛染毒对 HepG2 细胞 CPT1 和 SREBP-1c 蛋白表达影响26-27
• 2.5 甲醛染毒对肝细胞 TGH 和 MTP 蛋白表达的影响27-29
• 2.6 甲醛染毒对肝细胞 Arf1 、COPⅠ和 SAR1A 蛋白表达的影响29-32
• 2.7 甲醛染毒对 HepG2 细胞上清中 VLDL、ApoE 和 ApoB100 含量的影响32-34
• 第三章 讨论34-40
• 3.1 甲醛对 HepG2 细胞活性的影响34-35
• 3.2 Hoechst33258 染色结果35
• 3.3 甲醛对 HepG2 细胞内甘油三酯含量的影响35
• 3.4 甲醛染毒对 HepG2 细胞 CPT1 和 SREBP-1c 蛋白表达影响35-36
• 3.5 甲醛染毒对肝细胞 TGH 和 MTP 蛋白表达的影响36-37
• 3.6 甲醛染毒对肝细胞 Arf1 、COPⅠ和 SAR1A 蛋白表达的影响37-38
• 3.7 甲醛染毒对 HepG2 细胞上清中 VLDL、ApoE 和 ApoB100 含量的影响38-40
• 第四章 结论40-41
• 参考文献41-46
• 附录 综述46-57
• 参考文献54-57
• 个人简历57-58
• 致谢58

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 徐强,张秀珍,钱松,匡国正,赵龙健,冼海林;室内空气中甲醛污染对健康的影响及其控制[J];江苏预防医学;1996年03期

2 张成云,刘念;甲醛污染对人体健康的影响[J];四川医学;1999年05期

3 李晓东,丁珏;南通市部分装修住宅室内空气中甲醛浓度的调查[J];预防医学情报杂志;2003年01期

4 冯正,李军,骆蔓;新装修办公楼室内空气甲醛污染状况调查[J];贵州医药;2005年04期

5 余炳辉;部分食品受甲醛污染的成因及对策[J];现代预防医学;2001年04期

6 良阳;;甲醛危害面面观[J];人人健康;2010年24期

7 崔力争,张建华;大医院病理科甲醛污染危害的评价[J];中国卫生工程学;1995年04期

8 魏立,李俊康,金立坚,许建强,张荣;新装修居室甲醛污染调查[J];中国卫生工程学;2003年02期

9 张承平，王敏荣，韩树清，王美丽;家具展销厅空气甲醛污染调查[J];环境与健康杂志;1994年04期

10 陆学奎,梁炜;苏州市室内装修空气中甲醛污染状况及防治研究[J];医学动物防制;2002年09期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 任吉萍;郭家秀;尹华强;楚英豪;梁娟;;室内甲醛气体净化技术的研究进展[A];2011中国环境科学学会学术年会论文集（第四卷）[C];2011年

2 王子玉;;室内装修甲醛污染及健康危害(摘要)[A];全国铁路第五届疾病控制学术研讨会论文集[C];2004年

3 李庆英;;铁路候车室空气中甲醛污染调查(摘要)[A];全国铁路第五届疾病控制学术研讨会论文集[C];2004年

4 王维宽;庄晓虹;佟伟钢;胡峗;;沈阳市室内外空气中甲醛分布特征研究[A];2011中国环境科学学会学术年会论文集（第二卷）[C];2011年

5 刘勇;江莉;赵凤雯;谭晶;杨卫民;;熔体电纺制备无光去除甲醛功能纤维的研究[A];“力恒杯”第11届功能性纺织品、纳米技术应用及低碳纺织研讨会论文集[C];2011年

6 赵洁;;居室内甲醛污染物的监测与控制技术研究[A];中国化学会第27届学术年会第02分会场摘要集[C];2010年

7 张西北;孙国刚;萧洪文;;关于医学院校解剖学实验室甲醛污染的综合研究[A];全国解剖学技术学术会议论文集[C];2007年

8 袁昌华;董博;;甲醛对解剖学教师健康影响的调查[A];全国解剖学技术学术会议论文集[C];2007年

9 王宏恩;邓高峰;唐冬芬;王智超;;空气净化器对甲醛净化效率的测试方法[A];庆祝北京制冷学会成立三十周年暨第十届学术年会论文集[C];2010年

10 李红霞;黄厚今;;甲醛的毒性研究进展[A];贵州省环境诱变剂学会第二届学术交流会论文集[C];2005年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 北京亚都科技股份有限公司总经理 何鲁敏;室内甲醛污染对人体的影响[N];中华建筑报;2003年

2 程平;家居装修谨防甲醛污染[N];福建科技报;2006年

3 本报记者 罗中云;儿童在盛夏更易受甲醛污染威胁[N];北京科技报;2006年

4 本报记者 王继红;祛除甲醛污染要治“本”[N];市场报;2002年

5 中国室内装饰协会室内环境监测中心;冬季怎样防止和减少室内甲醛污染[N];广东建设报;2002年

6 曹娴 尢微;写字楼成甲醛污染重灾区[N];苏州日报;2006年

7 ;点评2010年十大室内环境甲醛污染典型事件[N];消费日报;2011年

8 薛艳丽;装修甲醛污染事故频发 专家教你清除“隐形杀手”[N];中国建材报;2010年

9 曲京佳;祛除甲醛污染的生物清醛酶诞生[N];中国化工报;2008年

10 实习生 李崇寒;车上放包竹炭真能除甲醛吗？[N];科技日报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 孟国忠;几种室内植物对苯和甲醛复合污染响应的研究[D];南京林业大学;2013年

2 吴成秋;居室空气甲醛与苯污染的生殖和胚胎发育毒性及其作用机制研究[D];中南大学;2010年

3 黄丽萍;电晕放电与光催化协同净化室内空气研究[D];大连海事大学;2010年

4 彭国庆;甲醛诱导雌性大鼠卵巢及子宫毒性研究[D];中南大学;2011年

5 王先锋;静电纺纤维膜的结构调控及其在甲醛传感器中的应用研究[D];东华大学;2012年

6 杨慧;甲醛对大鼠学习记忆的影响及其机制研究[D];天津医科大学;2010年

7 庄晓虹;室内空气污染分析及典型污染物的释放规律研究[D];东北大学;2010年

8 翁觅离;杭州市室内醛酮浓度水平及污染源解析[D];浙江大学;2010年

9 卢楠;建筑室内典型化学污染物的散发规律及评价研究[D];天津大学;2010年

10 刘太宏;寡聚噻吩的稠环封端、光物理行为及其传感应用[D];陕西师范大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 骆康林;室内装修后空气中甲醛污染检测、分析与控制[D];南京理工大学;2011年

2 余翔;Pseudomonas putida IOFA1降解甲醛过程中的关键酶及其作用研究[D];厦门大学;2014年

3 皮东恒;盆栽植物净化室内空气中甲醛机理研究[D];北京化工大学;2010年

4 林莉莉;活性炭吸附气相甲醛的研究[D];华东理工大学;2014年

5 尹美尚;济南市市售干海产品中有害元素及甲醛含量的调查研究[D];山东大学;2014年

6 黄燕亭;铂基整体式催化剂在甲醛催化净化装置中的应用[D];广东工业大学;2014年

7 李彩霞;室内空气中甲醛检测采样点的研究[D];南京理工大学;2012年

8 蔡宝珍;环境因子对盆栽植物净化甲醛性能的影响研究[D];浙江农林大学;2011年

9 游览;常春藤代谢甲醛的机制及其甲醛胁迫响应基因的研究[D];昆明理工大学;2010年

10 闫丹丹;甲醛对HepG2细胞脂肪代谢的影响[D];山西医科大学;2014年

  本文关键词：甲醛对HepG2细胞脂肪代谢的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：371596