砷对Nrf2相关基因及抗氧化指标影响研究

发布时间：2017-05-17 18:06

  本文关键词：砷对Nrf2相关基因及抗氧化指标影响研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:观察砷对家兔皮肤组织角化损伤的影响;探讨砷对家兔皮肤组织中相关抗氧化酶水平、8-OHdG、MDA含量水平的影响;分析砷代谢水平,探讨皮肤组织抗氧化水平与尿中砷甲基化产物之间的关联性;分析砷对Keap1/Nrf2-ARE通路中Keap-1、Nrf2及相关抗氧化酶GCLC mRNA表达的影响。方法:亚慢性砷染毒成年健康清洁级雄性家兔30只,随机分为5组,即0(对照)、0.075(1/100 LD50)、0.15(1/50 LD50)、0.375(1/20 LD50)、0.75(1/10 LD50)mg/(kg.w),每组6只。染毒12周采集各组染砷家兔皮肤组织,通过电镜观察各砷染毒组家兔皮肤组织的角化损伤情况。通过相应试剂盒方法检测染砷家兔皮肤中8-OHdG、MDA、HO-1、MPO含量水平和CAT、GSH-Px的活力水平。同时采用高效液相色谱-氢化物发生原子荧光光谱(HPLC-HGAFS)法检测家兔尿中As(Ⅲ)、As(Ⅴ)、一甲基胂酸(MMA)和二甲基胂酸(DMA)含量,分析砷代谢情况[一甲基化率(PMI)、二甲基化率(SMI)]。通过实时荧光定量PCR(Real-Time Quantitative PCR)法检测家兔皮肤组织中keap1、Nrf2和GCLC m RNA的表达水平。结果:0.150 mg/(kg.w)砷染毒组家兔皮肤出现角质异常现象,随砷染毒剂量的升高,家兔皮肤角化损伤程度有所加重。0.750 mg/(kg.w)砷染毒剂量组家兔皮肤明显角化,细胞核严重不规则,异染色质聚集等现象。与对照组比较,0.150、0.375、0.750 mg/(kg.w)砷染毒剂量组家兔皮肤组织中CAT活力水平、HO-1含量水平以及0.750 mg/(kg.w)砷染毒剂量组GSH-Px活力水平较低,差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,0.375、0.750 mg/(kg.w)砷染毒剂量组家兔皮肤组织中DMA含量水平与0.750 mg/(kg.w)砷染毒剂量组8-OHdG含量水平较高,差异具有统计学意义(P0.05);与对照组比较,0.750 mg/(kg.w)砷染毒剂量组家兔尿中总砷(TAs)、As(Ⅲ)、DMA的含量水平和0.375、0.750 mg/(kg.w)砷染毒剂量组家兔尿中MMA含量水平及各剂量砷染毒剂量组PMI值以及0.150、0.375、0.750mg/(kg.w)砷染毒剂量组SMI值均较高,差异有统计学意义(P0.05);相关分析发现,HO-1含量水平、GSH-Px活力水平与MMA含量水平及PMI值均呈负相关关系(P0.05);MDA、8-OHdG含量水平与MMA含量水平及PMI值均呈正相关关系(P0.05)。家兔皮肤组织中Keap-1 mRNA表达量由对照组至0.750 mg/(kg.w)砷染毒剂量组呈现先降低后升高的趋势,0.075 mg/(kg.w)砷染毒剂量组Keap-1mRNA表达量较低,0.750 mg/(kg.w)砷染毒剂量组表达量较高,差异具有统计学意义(P0.05)。Nrf2及GCLC mRNA表达量由对照组至0.750 mg/(kg.w)砷染毒剂量组均呈现先升高后降低的趋势,0.075、0.150mg/(kg.w)砷染毒剂量组Nrf2mRNA表达量与0.075mg/(kg.w)砷染毒剂量组GCLC mRNA表达量均较高,而0.750mg/(kg.w)砷染毒剂量组Nrf2 mRNA表达量与0.375、0.750mg/(kg.w)砷染毒剂量组GCLC mRNA表达量均较低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:亚慢性砷染毒随剂量的升高可能促进砷的甲基化过程,机体内砷代谢产物MMA含量以及PMI值升高抑制相关抗氧化酶从而降低抗氧化水平致机体氧化损伤。0.075、0.150 mg/(kg.w)砷染毒剂量通过激活Keap1/Nrf2-ARE通路,Nrf2表达量升高并调控GCLC使之表达量升高进而维持氧化应激平衡。0.750mg/(kg.w)砷染毒剂量抑制Keap-1/Nrf2-ARE通路,Nrf2表达量降低并调控GCLC表达量随之下降致氧化损伤发生,机体抗氧化能力降低。
【关键词】：砷 皮肤 Keap1/Nrf2-ARE通路 抗氧化能力 尿砷
【学位授予单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R114
【目录】：

• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 前言12-14
• 材料与方法14-21
• 1 实验材料14-15
• 1.1 实验动物分组及染毒14
• 1.2 受试物14
• 1.3 主要仪器14-15
• 1.4 主要试剂15
• 2 实验方法15-20
• 2.1 染毒方式15-16
• 2.2 抗氧化指标测定16-17
• 2.3 尿砷代谢相关生化指标测定17-18
• 2.4 Keap-1、Nrf2、GCLCmRNA表达测定18-20
• 3 统计分析20
• 4 质量控制20-21
• 结果21-30
• 讨论30-36
• 小结36-37
• 致谢37-38
• 参考文献38-44
• 综述44-54
• 参考文献51-54
• 攻读硕士学位期间发表的论文54-55
• 导师评阅表55

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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  本文关键词：砷对Nrf2相关基因及抗氧化指标影响研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：374111