Ac-SDKP对PKA和ROCK信号交互作用的调节抑制矽肺纤维化的作用及其机制

发布时间：2017-05-18 06:21

  本文关键词：Ac-SDKP对PKA和ROCK信号交互作用的调节抑制矽肺纤维化的作用及其机制，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的研究N-乙酰基-丝氨酸-天门冬氨酰-赖氨酸-脯氨酸(N-acetyl-seryl-aspartyllysyl-proline,Ac-SDKP)是否能够通过活化c AMP依赖性蛋白激酶(protein kinase A,PKA)信号抑制血管紧张素(angiotensin,Ang)II/ROCK(Rho-associated coiled-coil-forming protien kinase)介导的矽肺肌成纤维细胞分化,进而发挥抗矽肺纤维化的作用。方法构建矽肺大鼠动物模型,并予以Ac-SDKP抗纤维化治疗或预防治疗,通过免疫荧光染色法观察肺组织内PKA蛋白、α-平滑肌激动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达与分布,western blot法检测PKA、ROCK、p-MBS、α-SMA、I型胶原蛋白的表达。MRC-5人胚肺成纤维细胞培养实验中采用Ang II诱导人胚肺成纤维细胞(MRC-5),并予以Ac-SDKP、Valsartan、Y-27632、6-Bnzc AMP预处理,通过免疫荧光染色法观察PKA、α-SMA的表达与定位,western blot法检测PKA、ROCK、p-MBS、α-SMA、I型胶原蛋白的表达。用SPSS17.0软件进行统计学分析,P0.05为差异具有统计学意义。结果在矽肺动物模型组中,免疫荧光化学染色可见α-SMA在矽肺组高表达,而PKA则是低表达。western blot法检测矽肺4周、8周组中PKA蛋白表达下调,分别是对照4周、8周组的12.50%和10.25%,给予Ac-SDKP抗纤维化治疗或预防治疗后则能够显著上调PKA蛋白表达,分别是矽肺8周组的3.50倍和4.62倍。而ROCK、P-MBS、α-SMA、I型胶原蛋白表达则正好相反。矽肺4周、8周组ROCK蛋白表达是对照4周、8周组的3.82倍和3.62倍,给予Ac-SDKP抗纤维化治疗或预防治疗后ROCK蛋白表达明显下调,分别是矽肺8周组的21.83%和22.98%;P-MBS蛋白表达在矽肺4周、8周组中表达明显上调,分别是对照4周、8周组的3.07倍和2.78倍,给予Ac-SDKP抗纤维化治疗或预防治疗后p-MBS蛋白表达明显下调,分别是矽肺8周组的48.31%和50.56%;α-SMA蛋白在矽肺4周、8周组表达上调,分别是对照4周、8周组的6.26倍和4.05倍,给予AcSDKP抗纤维化治疗或预防治疗后,α-SMA蛋白表达分别是矽肺8周组的43.20%和28.39%;I型胶原蛋白在矽肺4周、8周组明显上调,分别是对照4周、8周组的6.88倍和5.53倍,给予Ac-SDKP抗纤维化治疗或预防治疗后I型胶原表达明显下调,分别是矽肺8周组的52.77%和65.27%;差异均有统计学意义(P0.05)。体外细胞培养实验中,给予Ang II诱导MRC-5细胞,Ang II能够刺激MRC-5细胞表达α-SMA和I型胶原蛋白,并呈现出一定的时间依赖效应。免疫荧光染色显示,给予Ang II诱导后PKA表达则较对照组明显减弱,而α-SMA蛋白表达显著增强。同时western blot检测结果显示:给予Ang II刺激诱导后PKA蛋白表达明显下调,是对照组的21.13%,当给予Ac-SDKP、Valsartan或Y-27632预处理后PKA蛋白显著增高,分别是Ang II组的5.23倍、5.96倍、3.30倍,予以PKA激活剂6-Bnz-c AMP诱导后,呈现出和Ac-SDKP相同的表达结果,是Ang II刺激组的3.88倍。给予Ang II诱导后,ROCK、p-MBS、α-SMA、I型胶原蛋白表达均上调,其中,Ang II刺激组中ROCK蛋白表达是对照组的2.46倍,当给予AcSDKP、Valsartan、Y-27632或PKA激活剂6-Bnz-c AMP预处理后,ROCK蛋白表达明显降低,分别是Ang II刺激组的46.87%、52.50%、56.87%、51.87%;Ang II刺激组的p-MBS蛋白是对照组的3.02倍,当给予Ac-SDKP、Valsartan、Y-27632或PKA激活剂6-Bnz-c AMP预处理后,p-MBS蛋白表达明显降低,分别是Ang II刺激组的31.12%、24.50%、21.19%、19.86%;Ang II刺激组α-SMA蛋白表达较对照组明显增高,是对照组的2.67倍,当给予Ac-SDKP、Valsartan、Y-27632或PKA激活剂6-Bnz-c AMP预处理后,α-SMA蛋白表达明显降低,分别是Ang II刺激组的39.66%、27.37%、44.13%、22.90%;Ang II刺激组I型胶原蛋白表达,是对照组的4.02倍,当给予Ac-SDKP、Valsartan、Y-27632或PKA激活剂6-Bnzc AMP预处理后,I型胶原表达明显降低,分别是Ang II刺激组的45.22%、36.94%、43.94%、45.85%;差异均有统计学意义(P0.05)。以上结果表明AcSDKP能够通过对PKA表达的上调,抑制Ang II介导的ROCK信号通路,进而阻抑肌成纤维细胞的分化。结论Ac-SDKP能够通过对PKA和ROCK信号交互作用的调节,抑制Ang II诱导的肌成纤维细胞的分化,从而发挥抗矽肺纤维化的作用。
【关键词】：N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸 血管紧张素II 肌成纤维细胞 肺纤维化
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R135.2
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略表10-11
• 引言11-12
• 第1章 实验研究12-34
• 1.1 材料与方法12-18
• 1.1.1 材料12-14
• 1.1.2 细胞培养实验14-16
• 1.1.3 矽肺大鼠动物模型实验16-17
• 1.1.4 检测指标17-18
• 1.1.5 统计学处理18
• 1.2 结果18-26
• 1.2.1 大鼠肺组织内PKA、α-SMA蛋白的分布与表达18-21
• 1.2.2 Ang II诱导MRC-5 人胚肺成纤维细胞PKA、ROCK、p-MBS、α-SMA和I型胶原蛋白表达的时间依赖效应21-23
• 1.2.3 Ac-SDKP对AngII诱导刺激MRC-5 细胞的PKA、ROCK、p-MBS、α-SMA和I型胶原蛋白表达的调节23-26
• 1.3 讨论26-30
• 1.3.1 血管紧张素II（Ang II）对肌成纤维细胞分化的调节作用26-27
• 1.3.2 cAMP/PKA信号与ROCK/p-MBS信号交互作用调控肌成纤维细胞的转化27-29
• 1.3.3 Ac-SDKP对Ang II介导的肌成纤维细胞分化的调节作用29-30
• 1.4 小结30-31
• 参考文献31-34
• 第2章 综述 RAS与器官纤维化34-48
• 2.1 肌成纤维细胞转化与器官纤维化34-36
• 2.2 肾素血管紧张素系统与器官纤维化36-38
• 2.3 ROCK信号与器官纤维化38-41
• 2.4 Ac-SDKP与矽肺纤维化41-42
• 参考文献42-48
• 结论48-49
• 致谢49-50
• 导师简介50-51
• 作者简介51-53
• 学位论文数据集53

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

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中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 徐洪;Ac-SDKP抗矽肺纤维化作用的新靶向—肌成纤维细胞分化和差异蛋白的筛选[D];河北医科大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 刘恒;Rho/Rho激酶信号通路和肝细胞生长因子在2型糖尿病大鼠肾病中的作用[D];河北医科大学;2012年

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本文编号：375319