介孔二氧化硅纳米颗粒SBA-15致人脐静脉血管内皮细胞毒性研究

发布时间：2017-05-19 05:16

  本文关键词：介孔二氧化硅纳米颗粒SBA-15致人脐静脉血管内皮细胞毒性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：随着纳米技术的发展，纳米材料的应用领域不断扩大，已经有许多纳米粒子在不断地进入人类赖以生存的空间，与此同时，会有越来越多的人暴露于纳米材料。因纳米颗粒物特有的小尺寸效应、表面效应和宏观量子隧道效应等，当其进入生物体后可能引发特殊的生物效应，因此纳米材料的生物安全性引起了人们的广泛关注。因介孔二氧化硅纳米颗粒（MSN）优良的结构性能，目前正广泛地用于药物载体研究，其进入临床使用后，对人体的暴露更加直接，其生物学效应更加不容忽视。血管内皮细胞是血管官腔与血管壁深层的第一道屏障，既往研究发现血管内皮的损伤是许多心血管疾病的先决条件。本研究选择介孔二氧化硅SBA-15和人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）为研究对象，探索SBA-15的心血管毒性效应及其机制,以期为MSN作为药物载体的安全使用提供理论依据。 方法：将HUVEC暴露于终浓度分别为0(空白对照)、25、50、100、200μg/mlSBA-15和100μg/ml微米二氧化硅(阳性对照)的RPMI1640培养液中培养24h，采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定SBA-15对HUVEC增殖的抑制作用，异硫氰酸荧光素FITC标记膜联蛋白Annexin V和核酸染料碘化丙啶（PI）双染结合流式细胞术检测SBA-15对HUVEC细胞凋亡的影响；二氯荧光乙酰乙酸盐（DCFH-DA）探针结合激光共聚焦显微镜技术检测SBA-15作用下HUVEC细胞活性氧(ROS)水平的变化，实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)检测SBA-15对炎症因子CRP和MCP-1和细胞粘附因子ICAM-1和VCAM-1mRNA表达水平的影响，Western Blot技术检测细胞粘附因子ICAM-1和VCAM-1蛋白表达水平的变化。 结果：与空白对照组比较，各浓度SBA-15均对HUVEC的增殖具有抑制作用，且随着SBA-15染毒浓度的升高，细胞生存率下降，差异有统计学意义(P＜0.05)；与空白对照组比较，50、100和200μg/ml SBA-15染毒组HUVEC细胞凋亡率增高，差异有统计学意义(P＜0.05)；随着SBA-15染毒浓度的升高，细胞ROS水平升高；与空白对照组相比，SBA-15染毒组炎症因子CRP和MCP-1mRNA和细胞粘附因子ICAM-1和VCAM-1mRNA及蛋白的表达水平均升高，差异有统计学意义(P＜0.05)，且随着SBA-15染毒浓度的升高，表达水平均呈上升趋势。 结论：SBA-15具有内皮细胞毒性作用，可抑制HUVEC的增殖；细胞凋亡和细胞坏死是SBA-15致HUVEC死亡的两种并存方式；SBA-15可能导致动脉粥样硬化疾病的发生；氧化应激和炎症可能是SBA-15致HUVEC细胞毒性的重要机制。
【关键词】：介孔二氧化硅纳米颗粒 SBA-15 人脐静脉血管内皮细胞 氧化应激 炎症
【学位授予单位】：宁夏医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114;TB383.1
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 符号说明8-11
• 前言11-19
• 1. 介孔材料的发展12-13
• 2．介孔材料在医学中的应用13-15
• 3. 选题的意义15-19
• 材料和方法19-31
• 1．材料19-22
• 1.1 细胞19
• 1.2 受试材料19
• 1.3 细胞培养使用耗材19
• 1.4 主要试剂19-20
• 1.5 主要仪器20
• 1.6 主要试剂配制20-22
• 2．方法22-31
• 2.1 SBA-15 的表征22
• 2.2 SBA-15 溶液的配制22-23
• 2.3 细胞培养与染毒23
• 2.4 MTT 细胞毒性实验23-24
• 2.5 流式细胞术检测细胞凋亡24-25
• 2.6 激光共聚焦显微镜检测细胞 ROS 水平25
• 2.7 qRT-PCR 检测细胞 CRP、MCP-1、ICAM-1、VCAM-1 mRNA 表达水平25-28
• 2.8 Western Blot 检测细胞 ICAM-1、VCAM-1 蛋白表达水平28-30
• 2.9 数据处理及分析30-31
• 结果31-40
• 1. SBA-15 材料表征31-32
• 2. SBA-15 对 HUVEC 细胞增殖的抑制作用32-33
• 3. SBA-15 对 HUVEC 细胞凋亡的影响33-35
• 4. SBA-15 对 HUVEC 细胞 ROS 水平的影响35
• 5. SBA-15 对 HUVEC 细胞炎症因子 CRP 和 MCP-1 mRNA 表达水平的影响35-37
• 6. SBA-15 对 HUVEC 细胞粘附因子 ICAM-1 和 VCAM-1 mRNA 表达水平的影响37-38
• 7. SBA-15 对 HUVEC 细胞粘附因子 ICAM-1、VCAM-1 蛋白表达水平的影响38-40
• 讨论40-46
• 1. SBA-15 对 HUVEC 的细胞毒性40-41
• 2. SBA-15 致 HUVEC 细胞死亡方式探讨41-42
• 3. SBA-15 致 HUVEC 细胞毒性机制探讨42
• 4. SBA-15 与动脉粥样硬化的关系42-46
• 结论46-47
• 参考文献47-56
• 文献综述56-66
• 综述参考文献62-66
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文66-67
• 致谢67

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