镍致大鼠Leydig细胞类固醇合成障碍中lncRNA-miRNA-mRNA调控网络的构建及相关机制研究

发布时间：2023-04-03 00:49

　　目的:通过建立硫酸镍(NiSO₄)体外处理的大鼠睾丸间质(Leydig)细胞类固醇合成障碍模型,筛选显著性差异表达的长链非编码RNAs(lncRNAs)、微小RNA(miRNAs)以及mRNAs并验证,构建竞争性内源性RNA(ceRNA)调控网络并检测PI3K/Akt信号通路相关基因和蛋白的表达,探讨其在镍致大鼠Leydig细胞类固醇合成障碍中的作用机制。方法:(1)摘取大鼠睾丸,采用0.25%IV型胶原酶消化、Percoll密度梯度(5%、30%、58%和70%)离心法和体外差速贴壁培养得到纯化的Leydig细胞。(2)使用不同浓度NiSO₄(0、250、500和1000μmol/L)处理处于对数生长期的Leydig细胞24 h,于倒置相差显微镜下观察细胞形态的改变。(3)采用MTT法对Leydig细胞存活率进行测定。(4)酶联免疫吸附试验(ELISA)用于检测在1 IU/mL人绒毛膜促性腺激素(hCG)存在下不同浓度NiSO₄(0、250、500和1000μmol/L)处理24 h的Leydig细胞培养液中睾酮含量。...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 镍的来源与暴露
    1.2 镍的一般毒性及特殊毒性
    1.3 镍的生殖毒性
    1.4 镍对Leydig细胞类固醇生成的影响
    1.5 非编码RNAs与镍的毒性
    1.6 非编码RNAs对类固醇生成的影响
    1.7 CeRNA机制
    1.8 PI3K/Akt信号通路对类固醇生成的影响
    1.9 研究目的及意义
    1.10 技术路线图
第二章 镍致大鼠Leydig细胞类固醇合成障碍研究及相关ceRNA网络的构建
    2.1 实验材料
    2.2 实验方法
    2.3 实验结果
    2.4 讨论
第三章 PI3K/Akt信号通路在镍致大鼠Leydig细胞睾酮生成障碍中的作用研究
    3.1 实验材料
    3.2 实验方法
    3.3 实验结果
    3.4 讨论
第四章 结论与展望
    4.1 结论
    4.2 不足与展望
参考文献
缩略词表
在校期间的研究成果
致谢



本文编号：3780306