2012-2013四川部分地区市售鸡肉中沙门氏菌污染及耐药性分析

发布时间：2017-05-19 14:08

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【摘要】：沙门氏菌(Salmonella)是一种常见的人兽共患病原菌,广泛存在于自然界,它不仅能够引起家禽的各种疾病,还能够通过污染的畜禽产品,威胁人体健康。据资料统计,在我国细菌性食物中毒中,由沙门氏菌引起的位列首位,而在引起沙门氏菌中毒的食品中,约90%是肉、蛋、奶等畜禽产品。鸡肉是我国主要的畜禽产品之一,肉鸡在养殖过程中容易受到沙门氏菌感染。随着养殖环节抗生素大量使用,沙门氏菌对常用抗菌药物的耐药率逐渐增强,且其耐药性可通过食物链传播到人群。因此,对市售鸡肉中沙门氏菌、特别是耐药性沙门氏菌污染情况和耐药情况进行研究,对食品安全具有重要意义。本实验从四川部分地区采集鸡肉样品400份,从中分离出61株沙门氏菌,并进行耐药性分析、Ⅰ类整合子／基因盒、耐磺胺基因检测,主要结果如下。1.市售鸡肉中沙门氏菌的分离鉴定及血清分型2012年至2013年,从四川成都、遂宁、雅安等地采集鸡肉样品400份,按照GB 4789.4-2010的方法,分离沙门氏菌疑似菌株,并以沙门氏菌的invA基因和hut基因为靶基因设计两对特异性引物,对疑似菌株进行二重PCR鉴定。结果显示,从市售鸡肉中准确鉴定出61株沙门氏菌,污染率为15.3%。通过血清学实验,判定其中肠炎沙门氏菌占45.90%(28/61),鼠伤寒沙门氏菌占37.70%(23/61)。2.市售鸡肉中沙门氏菌的耐药性分析采用纸片琼脂法,对61株沙门氏菌进行10种抗生素的耐药性分析,结果表明沙门氏菌分离菌株对萘啶酸(100%)、氨苄西林(90.16%)、四环素(68.85%)、环丙沙星(60.66%)、大观霉素(47.54%)、甲氧苄啶／磺胺异嗯唑(39.34%)的耐药率较高；对阿莫西林／克拉维酸(19.67%)、氟苯尼考(14.75%)、头孢曲松(9.84%)、庆大霉素(8.20%)的耐药率较低。但值得注意的,对阿莫西林／克拉维酸的中介耐药率较高,为54.10%。同时61株沙门氏分离菌对10种抗菌药物产生了22种耐药谱,44株菌株产生了多重耐药性(72.13%)。3.多重耐药沙门氏菌耐药基因检测(1)多重耐药沙门氏菌的Ⅰ类整合子/基因盒PCR检测将本研究中44株具有多重耐药性的沙门氏菌进行Ⅰ类整合子int1基因的PCR扩增,有17株检出intl基因,阳性率为38.64%；其中有16株具有五种以上的耐药谱的菌株。17株Ⅰ类整合子阳性菌株中有15株扩增出基因盒,经过测序15株全部携带基因片段bln(OXA-30)-aadAl,该基因编码可能与β-内酰胺类、氨基糖苷类和磺胺类抗生素的耐药相关。而其中两株还同时带有dfrA1-orfC基因盒,这两株菌的耐药谱也更加广泛,耐药种类达到9种。(2)多重耐药沙门氏菌的耐磺胺基因的PCR检测本研究中的24株甲氧苄啶/磺胺异嗯唑耐药菌,有11株检出sull,22株检出sul2,10株检出sul3,sul基因的检出率为91.67%,与药敏实验相比,耐药基因的符合率为91.67%。在17株检出intl基因的菌株中同时有3株携带sul1+sul2耐磺胺基因,有1株携带sul1+sul2+sul3耐磺胺基因,也证明了沙门氏菌磺胺类耐药基因与Ⅰ类整合子关系密切。本文对2012-2013年间,四川部分地区市售鸡肉中沙门氏菌的污染和耐药性做了详细分析,并对多重耐药菌株进行整Ⅰ类整合子/基因盒、耐磺胺基因的PCR检测,为沙门氏菌风险预测控制提供基础数据,为今后食品安全工作中沙门氏菌的有效监测和防止提供参考,同时为指导养鸡业养殖环节合理用药、降低耐药菌株产生,控制其传播提供理论依据。
【关键词】：沙门氏菌 二重PCR 耐药性 Ⅰ类整合子 耐磺胺类基因
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R155.5
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-8
• 缩略词表8-11
• 1 前言11-21
• 1.1 食品中沙门氏菌的污染情况11-12
• 1.1.1 国外食品中沙门氏菌污染情况11
• 1.1.2 国内食品中沙门氏菌的污染情况11-12
• 1.2 沙门氏菌的分离鉴定方法12-13
• 1.2.1 常规生化鉴定方法12
• 1.2.2 分子生物技术鉴定方法12-13
• 1.3 沙门氏菌血清学研究现状13-14
• 1.4 沙门氏菌的耐药情况分析14-17
• 1.4.1 细菌耐药性及药敏试验14-15
• 1.4.2 国外沙门氏菌的耐药情况15-16
• 1.4.3 国内沙门氏菌耐药耐药情况16-17
• 1.5 沙门氏菌耐药机制研究17-19
• 1.5.1 沙门氏菌1类整合子/基因盒系统研究17-18
• 1.5.2 沙门氏菌耐磺胺类药物研究18-19
• 1.5.3 沙门氏菌Ⅰ类整合子/基因盒与磺胺类耐药的关系19
• 1.6 研究的目的和意义19-20
• 1.7 研究的内容和技术路线20-21
• 1.7.1 研究内容20
• 1.7.2 技术路线20-21
• 2 材料与方法21-30
• 2.1 材料21-23
• 2.1.1 样品来源21
• 2.1.2 菌株21
• 2.1.3 引物21-22
• 2.1.4 培养基22
• 2.1.5 主要试剂22
• 2.1.6 主要仪器22-23
• 2.1.7 药敏抗生素纸片23
• 2.2 方法23-30
• 2.2.1 市售鸡肉中沙门氏菌的分离鉴定23-25
• 2.2.2 沙门氏菌分离菌株的血清分型25
• 2.2.3 沙门氏菌分离菌株的药敏实验25-27
• 2.2.4 多重耐药沙门氏菌耐药机制分析27-30
• 3 结果与分析30-39
• 3.1 市售鸡肉中沙门氏菌的污染情况30-32
• 3.1.1 疑似沙门氏菌的分离纯化结果30-31
• 3.1.2 PCR引物特异性试验结果31
• 3.1.3 疑似沙门氏菌的二重PCR鉴定结果31-32
• 3.1.4 市售鸡肉中沙门氏菌的污染情况32
• 3.2 市售鸡肉中沙门氏菌的血清型分布情况32
• 3.3 市售鸡肉中沙门氏菌的药敏实验结果32-34
• 3.3.1 沙门氏菌分离菌株的耐药情况32-33
• 3.3.2 沙门氏菌分离菌株的多重耐药性及耐药谱33-34
• 3.4 多重耐药沙门氏菌耐药基因检测结果34-39
• 3.4.1 沙门氏菌Ⅰ类整合子/基因盒系统的携带情况35-36
• 3.4.2 沙门氏菌耐磺胺类药物sul基因的检测结果36-39
• 4 讨论39-41
• 4.1 市售鸡肉中沙门氏菌的检测方法分析39
• 4.2 市售鸡肉中沙门氏菌的污染情况分析39
• 4.3 市售鸡肉中沙门氏菌的血清分型39
• 4.4 市售鸡肉中沙门氏菌的耐药性分析39-40
• 4.5 多重耐药沙门氏菌株的Ⅰ类整合子/基因盒系统分析40
• 4.6 多重耐药沙门氏菌株耐磺胺基因分析40-41
• 4.7 沙门氏菌Ⅰ类整合子/基因盒与耐磺胺基因携带关系41
• 5 结论与展望41-43
• 5.1 结论41-42
• 5.2 展望42-43
• 参考文献43-46
• 致谢46

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