BMSCs通过SIRT1/HIF-1α途径减少内质网应激介导的细胞凋亡修复Cr(Ⅵ)致大鼠肝脏损伤的研究
发布时间：2023-05-13 19:37
目的:观察骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)静脉移植对六价铬[Cr(Ⅵ)]致大鼠肝脏损伤的修复作用,探讨BMSCs是否通过SIRT1/HIF-1α途径减少内质网应激介导的细胞凋亡修复肝脏损伤的机制。方法:采用全骨髓贴壁的方法分离、纯化、培养BMSCs,应用流式细胞仪检测其细胞周期和表面标志CD45和CD90,应用成脂诱导液诱导其向脂肪细胞分化,油红O染色鉴定。24只Wistar大鼠被随机分成对照组、模型组和细胞治疗组,每组8只,通过腹腔注射的方式分别给予含0、0.4和0.4 mg/kg.bw Cr6+的重铬酸钾盐溶液,每周染毒5次,连续染毒30天。染毒结束后,细胞治疗组大鼠在24h和48 h经球后静脉移植氯甲基苯甲酰胺(CM-Dil)标记的BMSCs,每次0.1 mL细胞悬液(5×106个细胞),对照组和模型组给予同体积的磷酸缓冲盐溶液。观察大鼠饮食饮水状况和精神状态。2周后杀死大鼠,检测血清ALT(Alanine aminotransferase)和AST(Aspartate...
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
abstract
英文缩略词
第1章 绪论
1.1 Cr(Ⅵ)及其污染状况
1.2 人群Cr(Ⅵ)暴露途径
1.3 Cr(Ⅵ)对机体的损害
1.3.1 Cr(Ⅵ)对肝脏的损害
1.3.2 Cr(Ⅵ)对肾脏的损害
1.3.3 Cr(Ⅵ)对睾丸的损害
1.3.4 Cr(Ⅵ)对机体的其他损害
1.4 Cr(Ⅵ)致肝脏损伤的机制
1.4.1 氧化应激
1.4.2 炎症反应
1.4.3 DNA损伤和致突变性
1.4.4 线粒体损伤
1.4.5 肝细胞Ca2+超载
1.4.6 细胞周期阻滞
1.4.7 内质网应激介导的凋亡
1.5 Cr(Ⅵ)致肝脏损伤的治疗现状
1.6 干细胞移植治疗概述
1.6.1 干细胞和骨髓间充质干细胞
1.6.2 BMSCs移植治疗肝脏疾病的现状
1.6.3 BMSCs移植治疗肝脏疾病的机制
第2章 材料与方法
2.1 主要试剂与仪器
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器
2.1.3 主要试剂的配制
2.1.4 实验动物
2.2 方法
2.2.1 BMSCs的分离、培养和扩增
2.2.2 BMSCs的细胞周期检测
2.2.3 BMSCs的鉴定
2.2.4 Cr(Ⅵ)致大鼠肝脏损伤模型的建立
2.2.5 CM-Dil标记BMSCs并移植
2.2.6 BMSCs对 Cr(Ⅵ)致大鼠肝脏损伤修复作用的观察
2.2.7 BMSCs对 Cr(Ⅵ)致大鼠肝脏损伤修复机制的探讨
2.2.8 统计学分析
第3章 结果
3.1 Cr(Ⅵ)致大鼠肝脏损伤模型病理结果
3.2 BMSCs的分离培养、扩增、鉴定和标记
3.2.1 BMSCs的分离培养
3.2.2 BMSCs的鉴定
3.2.3 CM-Dil标记BMSCs
3.3 BMSCs对 Cr(Ⅵ)致大鼠肝脏损伤的修复作用
3.3.1 大鼠一般状态观察
3.3.2 大鼠肝脏中铬含量
3.3.3 大鼠血清中ALT和 AST检测
3.3.4 大鼠肝脏大体观察和病理组织学变化
3.4 BMSCs对 Cr(Ⅵ)致大鼠肝脏损伤的修复机制
3.4.1 TUNEL法检测肝细胞凋亡
3.4.2 大鼠肝组织MDA含量和SOD活性
3.4.3 免疫组织化学法检测SIRT1和HIF-1α蛋白的表达
3.4.4 Western blot法检测SIRT1和HIF-1α蛋白的表达
3.4.5 免疫组织化学法检测内质网应激介导的凋亡相关蛋白的表达
3.4.6 Western blot法检测内质网应激介导的凋亡相关蛋白的表达
3.4.7 Western blot法检测Bcl-2和Bax的表达
3.4.8 BMSCs在大鼠肝脏的定植
第4章 讨论
4.1 BMSCs的分离培养和鉴定
4.1.1 BMSCs的分离培养和细胞周期
4.1.2 BMSCs的表面标志和分化能力鉴定
4.2 BMSCs对 Cr(Ⅵ)致大鼠肝损伤的修复作用
4.3 BMSCs对 Cr(Ⅵ)致大鼠肝损伤的修复机制
第5章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
本文编号：3816383
【文章页数】：62 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
abstract
英文缩略词
第1章 绪论
1.1 Cr(Ⅵ)及其污染状况
1.2 人群Cr(Ⅵ)暴露途径
1.3 Cr(Ⅵ)对机体的损害
1.3.1 Cr(Ⅵ)对肝脏的损害
1.3.2 Cr(Ⅵ)对肾脏的损害
1.3.3 Cr(Ⅵ)对睾丸的损害
1.3.4 Cr(Ⅵ)对机体的其他损害
1.4 Cr(Ⅵ)致肝脏损伤的机制
1.4.1 氧化应激
1.4.2 炎症反应
1.4.3 DNA损伤和致突变性
1.4.4 线粒体损伤
1.4.5 肝细胞Ca2+超载
1.4.6 细胞周期阻滞
1.4.7 内质网应激介导的凋亡
1.5 Cr(Ⅵ)致肝脏损伤的治疗现状
1.6 干细胞移植治疗概述
1.6.1 干细胞和骨髓间充质干细胞
1.6.2 BMSCs移植治疗肝脏疾病的现状
1.6.3 BMSCs移植治疗肝脏疾病的机制
第2章 材料与方法
2.1 主要试剂与仪器
2.1.1 主要试剂
2.1.2 主要仪器
2.1.3 主要试剂的配制
2.1.4 实验动物
2.2 方法
2.2.1 BMSCs的分离、培养和扩增
2.2.2 BMSCs的细胞周期检测
2.2.3 BMSCs的鉴定
2.2.4 Cr(Ⅵ)致大鼠肝脏损伤模型的建立
2.2.5 CM-Dil标记BMSCs并移植
2.2.6 BMSCs对 Cr(Ⅵ)致大鼠肝脏损伤修复作用的观察
2.2.7 BMSCs对 Cr(Ⅵ)致大鼠肝脏损伤修复机制的探讨
2.2.8 统计学分析
第3章 结果
3.1 Cr(Ⅵ)致大鼠肝脏损伤模型病理结果
3.2 BMSCs的分离培养、扩增、鉴定和标记
3.2.1 BMSCs的分离培养
3.2.2 BMSCs的鉴定
3.2.3 CM-Dil标记BMSCs
3.3 BMSCs对 Cr(Ⅵ)致大鼠肝脏损伤的修复作用
3.3.1 大鼠一般状态观察
3.3.2 大鼠肝脏中铬含量
3.3.3 大鼠血清中ALT和 AST检测
3.3.4 大鼠肝脏大体观察和病理组织学变化
3.4 BMSCs对 Cr(Ⅵ)致大鼠肝脏损伤的修复机制
3.4.1 TUNEL法检测肝细胞凋亡
3.4.2 大鼠肝组织MDA含量和SOD活性
3.4.3 免疫组织化学法检测SIRT1和HIF-1α蛋白的表达
3.4.4 Western blot法检测SIRT1和HIF-1α蛋白的表达
3.4.5 免疫组织化学法检测内质网应激介导的凋亡相关蛋白的表达
3.4.6 Western blot法检测内质网应激介导的凋亡相关蛋白的表达
3.4.7 Western blot法检测Bcl-2和Bax的表达
3.4.8 BMSCs在大鼠肝脏的定植
第4章 讨论
4.1 BMSCs的分离培养和鉴定
4.1.1 BMSCs的分离培养和细胞周期
4.1.2 BMSCs的表面标志和分化能力鉴定
4.2 BMSCs对 Cr(Ⅵ)致大鼠肝损伤的修复作用
4.3 BMSCs对 Cr(Ⅵ)致大鼠肝损伤的修复机制
第5章 结论
参考文献
作者简介及在学期间所取得的科研成果
致谢
本文编号：3816383
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