低剂量双酚A通过PPARγ促进小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化的研究

发布时间：2017-05-20 21:07

  本文关键词：低剂量双酚A通过PPARγ促进小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景在近几十年里,肥胖患病率全球性快速增加,并呈现持续升高的状态。科学界提出了“环境致肥胖因子”的假说,环境致肥胖因子是指能够引起脂质代谢、脂肪储存、代谢定位点和能量平衡异常,进而促进脂质积累与肥胖的化学物质。越来越多的研究证据表明环境内分泌干扰物双酚A(BPA)是一种环境致肥胖因子,人类可经消化道、呼吸和皮肤接触等途径暴露BPA。BPA能潜在地影响脂肪细胞的分化过程和脂肪组织的生物学功能。很多研究表明低剂量BPA不仅能促进脂肪细胞分化,也能干扰脂肪细胞分泌脂肪因子和炎症因子,这对肥胖的炎性病理状态的形成有一定的作用。然而BPA暴露对脂肪细胞的分化及其对脂肪因子和炎症因子的调控机制目前还不清楚。研究目的通过检测低剂量BPA对分化过程中的小鼠3T3-L1前脂肪细胞的细胞增殖率,脂质沉积,脂肪因子、炎症因子以及C/EBP和PPARγ的表达影响,探讨低剂量BPA对小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化及其转录因子表达的影响;小鼠3T3-L1前脂肪细胞用PPARγ激动剂和抑制剂预处理后用BPA处理6天,检测细胞中脂质沉积、脂肪因子和炎症因子分泌,探讨PPARγ在BPA促进小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化的调控作用。研究方法体外培养的小鼠3T3-L1前脂肪细胞90%融合后,用诱导培养基A培养2天,换为诱导分化培养基B培养至第8天结束。在开始诱导分化时持续用10 nmol/L、100 nmol/L或1 000 nmol/L的BPA处理细胞,并设空白对照和DMSO溶剂组。在诱导分化第2、4、6、8天,用CCK8测细胞活率,油红O染色检测细胞内脂质沉积,ELISA法分析培细胞上清脂肪因子(瘦素、脂联素)和炎性因子(TNF-α、IL6、IL1β)的水平,实时荧光定量PCR法检测细胞内瘦素、脂联素、TNF-α、IL-6、IL-1β、PPARγ和C/EBP m RNA水平,免疫组化法检测细胞中PPARγ蛋白表达。PPARγ对BPA促进小鼠前脂肪细胞分化影响研究中,用1 000 nmol/L BPA处理细胞时用PPARγ激动剂罗格列酮或抑制剂GW9665同时处理细胞,诱导分化至第6天;油红O染色法分析脂肪细胞脂质沉积,ELISA分析上清中脂肪因子和炎性因子水平,实时荧光定量PCR法检测细胞中脂肪因子、炎性因子、PPARγ和C/EBP的m RNA表达水平,免疫组化检测细胞中PPARγ蛋白表达水平。实验数据采用SPSS 16.0统计软件进行录入和统计分析。结果1.低剂量BPA对分化过程中的小鼠3T3-L1前脂肪细胞活率和脂质沉积的影响1.1对细胞活率的影响CCK8结果显示,与同时间点空白对照组相比,诱导分化第2天,1 000 nmol/L BPA组细胞活率显著增强;诱导分化第4、6、8天,BPA处理组细胞活率下降;第6天时,1 000 nmol/L BPA组细胞活性下降,差异有统计学意义;第8天时,100 nmol/L BPA组和1 000 nmol/L BPA组细胞活性下降,差异有统计学意义。1.2对脂质沉积的影响油红O染色显示,与空白对照组相比,BPA处理组细胞内脂滴含量增多;定量分析显示,与空白对照组相比,第6天和第8天时,100nmol/L BPA和1 000 nmol/L BPA处理组脂滴明显增多,差异有统计学意义。2.低剂量BPA对分化过程中的小鼠3T3-L1前脂肪细胞的脂肪因子和细胞因子分泌的影响与空白对照组相比,第4天时,1 000 nmol/L BPA处理组上清中瘦素、TNF-α、IL-6、IL-1β水平和细胞中m RNA表达均升高,差异均有统计学意义;第6天和第8天时,100 nmol/L BPA和1 000 nmol/L BPA处理组瘦素、TNF-α、IL-6、IL-1β水平和m RNA表达明显升高,而脂联素因子水平和m RNA表达下降,差异均具有统计学意义。3.低剂量BPA对分化过程中的小鼠3T3-L1前脂肪细胞中PPARγ和C/EBP表达的影响与空白对照组相比,第4天时,1 000 nmol/L BPA处理组细胞中PPARγ和C/EBP m RNA水平升高,差异有统计学意义;第6天和第8天时,100 nmol/L BPA和1 000 nmol/L BPA组PPARγ和C/EBP m RNA水平均升高,差异有统计学意义。免疫组化检测显示PPARγ在细胞核周围表达,与空白对照组相比,BPA处理组PPARγ表达增强。4.PPARγ对BPA促进小鼠前脂肪细胞分化的调控4.1 PPARγ激动剂对BPA促进小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化的影响与空白对照组相比,罗格列酮组和罗格列酮+1 000 nmol/L BPA组细胞内脂质沉积明显增多,定量分析显示差异有统计学意义;上清中瘦素、TNF-α、IL-6、IL-1β水平和细胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγ、C/EBP m RNA表达均上升,而上清中脂联素水平和细胞中脂联素m RNA表达下降,差异均有统计学意义。与1000 nmol/L BPA组相比,罗格列酮+1 000 nmol/L BPA组细胞内脂质沉积增多,定量分析显示差异有统计学意义;上清中瘦素、TNF-α、IL-6水平和细胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγ、C/EBP m RNA表达均上升,而上清中脂联素水平和细胞中脂联素m RNA表达下降,差异均有统计学意义。与罗格列酮组相比,罗格列酮+1000 nmol/L BPA组细胞内脂质沉积增多,定量析显示差异无统计学意义;上清中瘦素、TNF-α、IL-6的表达升高,但无统计学意义;细胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγm RNA基因表达和PPARγ蛋白的表达均升高,差异均有统计学意义。4.2 PPARγ抑制剂对BPA促进小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化的影响与空白对照组相比,GW9665组和GW9665+1 000 nmol/L BPA组细胞内脂质沉积明显减少,定量分析显示差异有统计学意义;上清中瘦素、TNF-α、IL-6、IL-1β水平和细胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγ、C/EBP m RNA表达均下降,而上清中脂联素水平和细胞中脂联素m RNA表达升高,差异均有统计学意义。与1 000nmol/L BPA组相比,GW9665+1 000 nmol/L BPA组细胞内脂质沉积明显减少,定量分析显示差异有统计学意义;上清中瘦素、TNF-α、IL-6水平和细胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγ、C/EBP m RNA表达均下降,而上清中脂联素水平和细胞中脂联素m RNA表达升高,差异均有统计学意义。与GW9665组相比,GW9665+1 000 nmol/L BPA组细胞内脂质沉积变化不明显,定量析显示差异无统计学意义;上清中瘦素、TNF-α、IL-6的表达稍升高,但差异无统计学意义;细胞中瘦素、TNF-α、IL-6、PPARγm RNA基因表达和PPARγ蛋白的表达变化也不明显,差异无统计学意义。结论1.在体外诱导分化条件下,低剂量BPA促进小鼠3T3-L1前脂肪细胞的分化成熟,上调转录因子C/EBP和PPARγ的表达,干扰脂肪因子和炎症因子的表达。2.低剂量BPA可能通过PPARγ途径促进体外诱导分化的小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化成熟。
【关键词】：双酚A 小鼠3T3-L1前脂肪细胞 分化 PPARγ
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R114
【目录】：

• 中英文缩略词表5-7
• 摘要7-11
• 英文摘要11-16
• 1.前言16-18
• 2. 材料与方法18-24
• 3. 结果24-39
• 4. 讨论39-44
• 5. 结论44-45
• 参考文献45-53
• 附录53-54
• 致谢54-55
• 综述55-67
• 参考文献61-67

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