丙烯腈对大鼠T细胞亚群、Toll样受体4及氧化应激水平的影响

发布时间：2017-05-21 12:10

  本文关键词：丙烯腈对大鼠T细胞亚群、Toll样受体4及氧化应激水平的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：探讨丙烯腈(acrylonitrile,ACN)亚慢性中毒对大鼠T细胞亚群、Toll样受体4 (toll-like receptor 4,TLR4)水平及相关细胞因子的影响,了解Nrf-2、 ROS、HSP70mRNA的变化对氧化应激和免疫功能的影响。方法：SD大鼠随机分成雌雄各4组,每组8只,分别以0、5、10、20mg/kg剂量丙烯腈灌胃染毒,每日1次,每周5次,连续染毒13周。应用流式细胞术分析大鼠血液和脾脏T淋巴细胞亚群(CD3、CD4、CD8)的变化；采用实时荧光定量多聚酶链式反应(RT-PCR)分析脾脏Nrf-2、HSP70、ROS、TLR4、IL-1β和TNF-a mRNA表达水平的变化；应用蛋白免疫印迹法(Western blot)分析大鼠脾脏组织TLR4蛋白表达水平的变化。采用SPSS 16.0软件进行统计分析。计量资料采用x±s描述,多组均数比较采用单因素方差分析(One-way ANOVA) 。结果：①与对照组比较,染毒13周后,雌雄大鼠体重均成下降趋势,其中雌鼠10、20mg/kg组与雄鼠20mg/kg组体重明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。脾脏脏体比的变化呈上升趋势,雌鼠5、10、20mg/kg组与雄鼠20mg/kg组脾脏脏体比明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。通过比较对照组与剂量组的体重与脾脏比发现雌鼠较雄鼠敏感,雌鼠在染毒剂量为10mg/kg时体重明显降低,而雄鼠无明显变化。而雌鼠脾脏脏体比从5mg/kg开始有明显升高趋势,而雄性大鼠在剂量为20mg/kg的作用下脾脏脏体比才有明显升高趋势；病理结果显示：20mg/kg组大鼠主要病变为肝细胞浊肿及水样变性；肺细支气管炎、血管周围炎、代偿性肺气肿；大脑海马部海马部神经元空泡变性、脑水肿,并见部分玻璃样小体散在分布,胶质细胞局灶性增生；睾丸曲细精管间隙增宽,生精细胞减少。②血液T细胞亚群分析发现：与对照组相比雌鼠20mg/kg组CD3、CD4明显降低,5、10、20mg/kg组CD8细胞比例明显升高,CD4/CD8明显降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)；雄鼠5mg/kg组CD3,20mg/kg组CD4和CD4/CD8明显降低,CD8细胞比例明显升高,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)；脾脏T细胞亚群分析发现,雌鼠20mg/kg组CD4和CD4/CD8明显降低,CD8细胞比例明显升高,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)；雄鼠20mg/kg组CD3、CD8明显升高,20mg/kg组CD4和10、20mg/kg组CD4/CD8明显降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)；③与对照组比较,雌雄大鼠TLR4 mRNA及蛋白表达均呈下降趋势,雄鼠5、10、20mg/kg组和雌鼠10 mg/kg组TLR4 mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)；雌鼠5mg/kg组和雄鼠20 mg/kg组TLR4蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05)；④与对照组比较,雌鼠5、10、20mg/kg组和雄鼠5、10mg/kg组IL-1βmRNA表达量明显降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)；雌鼠10、20mg/kg组和雄鼠5、10mg/kg组TNF-α mRNA表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P0.01)。⑤与对照组比较,雌雄大鼠Nrf-2 mRNA表达呈下降趋势,雌雄大鼠5、10、20mg/kg组Nrf-2 mRNA表达均明显降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。雌鼠5mg/kg组降低最为明显,雄鼠20mg/kg组降低最为明显,丙烯腈对大鼠Nrf-2的影响,有明显的性别差异；雌雄大鼠ROS mRNA雌鼠表达呈下降趋势,10、20mg/kg组与雄鼠5、10、20mg/kg组ROS mRNA表达明显降低,差异均有统计学意义(P0.01)。雌鼠ROS mRNA的表达量随剂量增加而降低,而雄鼠呈现出双峰反应形式,5mg/kg与20mg/kg组ROS mRNA的表达量降低较10mg/kg组明显；与对照组比较,雌雄大鼠HSP70 mRNA表达呈下降趋势,雌鼠与雄鼠5、10、20mg/kg组HSP70 mRNA表达明显降低,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。雌雄大鼠HSP70 mRNA表达降低均以10mg/kg组最为明显。结论：丙烯腈可影响动物的生长发育,在长期亚慢性染毒作用下,具有脏器毒性,可引起血液及脾脏T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8及CD4和CD8的比值的变化,同时也明显影响TLR4 mRNA和蛋白的表达及相关细胞因子IL-1β、TNF-α分泌,这将会给机体的细胞免疫功能带来影响。脾脏ROS、Nrf-2和HSP70呈低表达,氧化应激水平减弱。
【关键词】：丙烯腈 Nrf-2 HSP70 ROS TLR4 T细胞亚群 IL-1β TNF-α
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R114
【目录】：

• 缩写词对照表4-6
• 中文摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-15
• 第一章 丙烯腈对大鼠体重、脾脏脏体比及脏器组织病理的影响15-22
• 1. 实验材料15
• 2. 实验方法15-17
• 3. 实验结果17-21
• 4. 讨论21-22
• 第二章 丙烯腈对大鼠T细胞亚群及Toll样受体4水平的影响22-38
• 1. 实验材料22-24
• 2. 实验方法24-29
• 3. 实验结果29-36
• 4. 讨论36-38
• 第三章 丙烯腈对大鼠脾脏Nrf-2、ROS、HSP70mRNA相对表达量的影响38-46
• 1. 实验材料38-39
• 2. 实验方法39-42
• 3. 实验结果42-44
• 4. 讨论44-46
• 小结46-47
• 参考文献47-53
• 综述53-62
• 参考文献58-62
• 硕士期间发表的文章62-63
• 致谢63-64

【参考文献】

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1 马国燕;金娜;李福轮;陈亚;薛红丽;李芝兰;;丙烯腈对小鼠肝组织脂质过氧化反应的影响[J];毒理学杂志;2011年05期

2 吴鑫,钟先玖,范卫,周元陵,金泰^

本文编号：383593